拉曼光谱在咖啡因及癌细胞检测中的应用研究.pdfVIP

I UlII I I I qU III IIII IIIII 摘要 18 Y18551 DissertationforMaster ofSouthChina Degree Normal University 拉曼光谱在生物碱及癌细胞检测中的应用研究 专业名称：光学 申请者姓名：康健 导师姓名：谷怀民 摘要 拉曼光谱被称为物质分子的“指纹特征，是一种无损、制样简单、快速有 效的测试手段。表面增强拉曼光谱(SERS)具有极高的检测灵敏度，能够从分 子水平上获取物质详细的结构和化学组成信息，因此拉曼光谱非常适用于生物分 子的测试研究。本文中利用拉曼光谱技术主要选取在生物物理领域具有代表性的 生物小分子咖啡因，及活体HELA细胞进行研究。主要内容如下： 咖啡因(1，3，7三甲基黄嘌呤)，属于嘌呤类，是最重要也是最常用的生 物碱。在不同pH条件下，人体对其吸收。在胃中pH=2，在血液或者体液中， pH为中性。所以研究不同pH条件下咖啡因的变化，有着现实的科学意义。然 而关于这方面的研究相对较少，结论也不全面。因为咖啡因的溶解度很低，所以 在以前的研究中，很难获得咖啡因水溶液的常规拉曼光谱；通常情况下都是使用 傅里叶变换拉曼光谱或者表面增强拉曼光谱进行研究。在本文中，为了研究pH 值对咖啡因拉曼光谱的影响，先测得不同pH值下咖啡因的表面增强拉曼光谱及 常规拉曼光谱，再进行分析。同时为了更好地分析咖啡因的拉曼光谱，弄清楚咖 啡因拉曼光谱谱峰的振动模式，本文选用DFT计算方法来优化咖啡因的形态， 并计算出无水咖啡因的拉曼光谱。研究表明，通过影响咖啡因分子与银溶胶表面 的再定位，pH值可以明显改变咖啡因的表面增强拉曼光谱；振动模式主要为 in-plane振动模式的谱峰，更容易被pH值影响；在酸性溶液中获得的咖啡因表 面增强拉曼光谱，比在碱性溶液中获得的表面增强拉曼光谱，更加接近咖啡因水 摘要 溶液的常规拉曼光谱。 在拉曼光谱检测中，水是最为常用的溶剂。本文简单探讨了水溶液对固体样 品拉曼光谱的影响。实验中测得同一样品不同浓度的拉曼光谱，以及不同样品及 其水溶液的拉曼光谱。通过对比同一样品不同浓度的拉曼光谱，发现在水溶液中 样品浓度并不能影响其拉曼光谱谱峰的半高宽。而对比样品及其水溶液的拉曼光 谱，则发现当样品溶解到水溶液后，拉曼光谱的谱峰半高宽有明显改变：多数谱 峰的半高宽变宽。同时伴随着拉曼谱峰的位移，既有红移又有蓝移。这可能是由 于样品溶解到水中时，其晶格结构遭到破坏，一些样品从原子态变成为离子态。 这些结构的变化引起谱峰半高宽的改变及谱峰的位移。结果表明：水溶液可以显 著影响固体样品的拉曼光谱；通过对比固体咖啡因的常规拉曼光谱与咖啡因水溶 液的表面增强拉曼光谱，发现表面增强拉曼光谱技术可以减小水溶液对固体样品 拉曼光谱的影响。 细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡，它 在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中起着重要的作用。目前检 测细胞凋亡的方法有很多，但是这些检测方法都只能定性的分析细胞是否凋亡以 及凋亡的细胞所处的细胞周期，无法获知细胞凋亡的内部变化及细胞凋亡的真正 原因。在本文中，选用HELA细胞进行检测，金标记后分别使用SERS及LSCM技 术对HELA细胞进行检测，提出了一种实时检测癌细胞凋亡的有效方法。依据 LSCM图像，可以明显观察到HELA细胞的形态变化。依据HELA细胞的表面增强 拉曼光谱，可以得到表面增强拉曼光谱谱峰的位移及强度变化。对比在不同时间 点测得的HELA细胞表面增强拉曼光谱，可明显观察到随着凋亡过程的进行，一 些表面增强光谱谱峰发生了位移，其强度变化也非常明显；并且在凋