癌症相关信号通路蛋白质组学分析的利器.PDFVIP

Gene Express 基因快讯2011年第2期 癌症相关信号通路蛋白质组学分析的利器 ——Cell Signaling Technology公司PTMScan技术平台及motif antibody 在信号转导研究中，蛋白质翻译后修饰 （PTM ）影 体及PTMScan ，通过WB 、MC/MC分析特异性地将Akt 、 响着蛋白质的多种功能和定位，同时对信号传导强度进 RSK 、p70 S6激酶的底物筛选出来，并描绘出了一幅RTK 行着精细而准确的调节。其中，比较重要的PTM修饰有 下游的信号通路网络，验证了300余种已知和新发现的底 磷酸化修饰、泛素化修饰、甲基化和乙酰化修饰等。 物，其中包括涉及支架、蛋白质稳定性、代谢、运动性等 越来越多的研究都提示信号通路蛋白的PTM修饰在 过程的蛋白。 癌症的发生、发展过程中，起着非常重要的调节作用， 酪氨酸激酶，它调节着细胞体内生长、分化、死亡 等一系列生理化过程。而近年来的研究表明，超过50% 的 原癌基因和癌基因产物都具有酪氨酸激酶活性，它们的 异常表达将导致细胞增殖调节发生紊乱，进而导致肿瘤 发生。此外，酪氨酸激酶的异常表达还与肿瘤的侵袭和 转移、新生血管的生成、化疗抗性等密切相关。因此， 越来越多的肿瘤课题研究围绕着酪氨酸激酶而展开。 2007年，Cell Signaling Technology （CST ）公司的科研团 队在 《Cell 》上发表了一篇文章，第一次运用磷酸化蛋 A．PTMScan 方法：用蛋白酶将细胞消化，再用琼脂糖珠偶联的识别 白质组学的方法，对4 1种非小细胞肺癌 （N SCLC ）细胞 RxRxxS*/T*序列 的P-Akt Substrate motif 抗体纯化出细胞中的相应肽段， 随后对肽段进行LC/MS分析。 系和150余种N SCLC肿瘤中的酪氨酸激酶进行了大规模 B．利用P-Tyr-100抗体、P-Akt Substrate对3个细胞系进行WB，显示出 了不同的模式。 研究。通过应用CST公司独有的Phospho-Tyrosine motif抗 体 (P-Tyr- 100)及PTMScan产品，对细胞或组织内所有具 有磷酸化酪氨酸位点的蛋白进行筛选，随后利用分层聚 类算法和对酪氨酸激酶进行打分，确认了ALK 、ROS、 PDGFRa 、DDR 1等酪氨酸激酶，它们在N SCLC 的发生过 程中起到重要的作用。 所验证得到的信号通路网络图及相应的部分底物 上述两个研究癌症信号通路的实例里都是运用了CST 公司极具特色的蛋白质翻译后修饰产品线——PTMScan 。 目前，CST所提供的PTM Scan还包括对蛋白乙酰化 A．利用Phospho-Tyrosine Mouse mAb (P-Tyr-100)对96种NSCLC肿瘤组 织进行IHC染色，分别显示出高p-Tyr、中p-Tyr及低p-Tyr的表达水平。 和蛋白泛素化修饰的高通量分析。通过PTMScan ，实验者 B．利用P-Tyr-100抗体对不同的细胞系进行WB，显示出了不同的模式。 可迅速获得100- 1000个蛋白修饰的变化情况，挖掘大量数 C．PTMScan 方法：用蛋白酶将细胞或组织消化，再用琼脂糖珠偶联的 p-Tyr-100抗体对得到的肽段进行亲和纯化，随后用LC-