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第五章 生物检定法 第一节 概述 一、生物检定定义: 利用药物对生物体(整体动物、离体组织、微生物等）的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。它以药物的药理作用为基础，统计学为工具，选用特定的实验设计，在一定的条件下比较供试品和相当的标准品所产生的特定反应，通过等反应剂量间比例的计算，从而测得供试品中活性成分的效价。 二、生物检定包括整体和离体测定: 整体： 直接反应药品对生物的作用，但费动物，供试品用量多，耗时长，精密度和灵敏度较差。 离体： 个体差异小，实验时间较短，精密度和灵敏度较高，能在一定程度上保留药理作用特性，尤其适用于微量激素的测定，缺点是不一定能反映供试品在整体的作用。 三、生物检定的应用范围 1 药物的效价测定 2检验方法的核对 3 体内微量生理活性物质的测定 4 中药质量的控制 5 某些有害杂质的限度检查 第二节 生物检定中的基本概念 （一）生物反应是生物检定的基础 生长素的测定方法： 形态方法 生物化学方法 a去垂体大鼠体重增加法 a正常狗血中含氮物减少法 b正常大鼠体重增加法 b去垂体大鼠血清碱性磷酸酶增加法 c侏儒小鼠体重增加法 c去肾大鼠中尿素氮减少法 d去垂体大鼠尾椎生长法 d正常狗或正常大鼠氮贮留增加法 e正常大鼠肝重 增加法 e去垂体大鼠血清无机磷增加法 f正常大鼠下颌骨或头盖骨测定法 f遗传性高血糖大鼠血糖上升法 g去垂体大鼠胫胃端软骨增加法g去垂体大鼠肾转脒基酶活性上升法 （二）剂量与反应关系 质反应:当观察某一反应或反应的某一特定程度出现与否，例如死或不死，惊厥或不惊厥，只能出现与不出现两种情况，故不能用量来表示个体的反应程度，只能用一组动物中出现正或负反应的百分率来表示，如死亡率，惊厥率，这类反应称质反应。 量反应:药物对生物体所引起的反应随着药物剂量的增加产生的量变可以测量者，称为量反应。 例如血压的变化值，血糖浓度，器官组织的重量等。 时反应:为特殊的量反应,它是观察某一反应或反应的某种程度出现所需时间，例如血液的凝结时间，动物生存时间等。 （三）对比检定 当标准品的剂量ds和供试品的剂量dt产生的反应程度相等时，ds，dt为标准品和供试品的等反应剂量，ds中所含的单位ds.Ps和dt中所含的单位dt..Pt相等，即Psds=Ptdt 两药效价的比值R=Pt/Ps=ds/dt (6-1,) 即标准品与供试品的效价的比值R是它们等反应量的反比。效价强R倍，等反应剂量就小R倍，相反亦然。 式中Ps已知，ds和dt是实验中所用的剂量，Pt是供试品的效价，是需要通过实验测定的。 Pt=dsPs/dt (6-2) lgR=M=lgPT/Ps =lgds/dT M=lgR=lgPt-lgPs=lgds-lgdt=Xs-Xt 效价比值（R）=antilgM=antilg(Xs-Xt）（6-3） 供试品效价Pt=antilg(Xs-Xt+lgPs） 当供试品按标示量或估计效价进行试验时 PT=R*供试品的估计效价或标示量 （6-4） 第三节 生物检定的常用方法 质反应直接测定法 质反应平行线测定法 量反应平行线测定法 质反应的直接测定法 直接测定法就是在较短的时间内能够准确的测得各个动物对S和T的最小效量的方法。 最小效量（MED）。由于生物的个体差异，最小有效量参差不齐，但有一定的规律性。 如洋地黄测定的鸽法： 直接测定的具体方法是将实验对象分成两组，一组为S，一组为T，分别测定S和T的MED，然后再计算出S和T各自地lgMED及均值Xs和Xt。 R=antilgM=antilg（Xs-Xt） S T MLDs(ds) Xs MLDT(dT) XT μ/Kg lg(ds*10) μ/kg lg(dT*10) 1.15 1.01 1.10 1.14 1.06 0.95 1.061 1.0044 1.041 1.057 1.025 0.978 1.11 1.23 1.06 1.31 0.94 1.36 1.045 1.090 1.025 1.117 0.973 1.134 Xs的和 6．166 XT的和 6.384 Xs平均 1．028 XT平均 1.064 ? 第四节　生物检定实例 一、胰岛素的生物检定法 本法系比较胰岛素标准品(S)与供试品(T)引起小鼠血糖下降的作用，以测定供试品的效价。