共聚焦显微技术简介.pdfVIP

共 聚 焦 显 微 技 术 简 介 尚忠林 (河北师范大学生命科学学院 河北石家庄 0500 16) 　　摘要　共聚焦显微镜在生物学研究中得到广泛应用。共聚焦显微技术按照显微镜构 造原理的不同分成激光扫描共聚焦和数字共聚焦显微技术两种。共聚焦技术具有成像清 晰、获得三维图像、进行多标记观察、活细胞内动态生理反应的实时观察记录、定性定量分 析等优势。与共聚焦显微技术相关的技术有荧光染料的选择、荧光指示剂装载以及图像数 据处理等。 　　关键词　激光共聚焦　数字共聚焦　荧光染料 　　共聚焦显微技术是近十几年迅速发展起来的一项 实现有两种方式: 激光共聚焦和数字共聚焦。 高新研究技术, 目前应用领域扩展到细胞学、微生物 1. 1　激光共聚焦显微术(L a ser Con foca l Scann ing M i 学、发育生物学、遗传学、神经生物学、生理和病理学等 cro scop y ) 　这种共聚焦技术利用激光作为激发光源, 学科的研究工作中, 成为现代生物学微观研究的重要 将激光聚焦于样品中的某一点, 这样只有该点附近的 工具。 区域有荧光, 其他没有被激发的部位没有荧光, 这一区 1　共聚焦显微技术的原理 域发出的荧光反射到光电倍增管, 在光电倍增管前设 有 1 个计算机控制的可调节针孔 (p inho le) , 保证只有 被激发点发出的荧光才能到达光电管, 而附近其他点 ( ) 所发出的荧光被挡在视野之外 如图 。采用计算机控 制激光和针孔, 对细胞内的某一层面进行扫描, 可以获 得清晰的二维图像。 　　这一技术成像速度快、自动化程度高。但激光具有 单色性, 1 种激光器只能发出某几个特定波长的激光, 而荧光染料的种类很多, 其激发光波长各不相同, 这样 在使用某种型号的激光器时, 只有少数几种荧光染料 可以使用, 而其他大多数的染料不能使用; 目前同时配 备数个不同激光器或多光子脉冲激光器的激光共聚焦 系统的出现, 虽然可以解决这一难题, 但是设备结构复 杂、价格昂贵, 维护保养要求较高。 1. 2　数字共聚焦显微术 (D igita lCon foca lM icro scop y ) 　这一技术是随着计算机软件技术的发展出现的, 与 激光共聚焦的原理有极大的区别, 它在普通的荧光显 微镜上加上 1 个计算机控制的高分辨率、带有制冷装