高效液相色谱法正式版概要.pptx

第 16 章 高效液相色谱法;16-1 概述;16-1-2 液相色谱分离原理及分类 ;2.液相色谱的分类;1.高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较;2.高效液相色谱法与气相色谱法的比较;③ 两者的差异;b.流动相差别;3. 液相色谱柱效;（3）Hs=Cs’df 2 u/Ds , Cs’与分配比k’有关的系数，df 为固定液液膜厚 度，Ds为组分在固定液中的扩散系数，因此，可以通过改善传质过程 ，加快组分分子在固定相上的解吸过程来提高柱效。对液液分配色谱 ，可以使用较薄的固定相层；对于化学键合相，此项可忽略；对吸附 、排阻与离子交换色谱可以使用较小颗粒的填料。;16-2 高效液相色谱仪; 高效液相色谱仪由高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统和记录系统组成。;16-2-1 高压输液系统;2. 高压输液泵;分类：⑴ 恒流泵;又称高压梯度，利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱，具有流量精确度高和梯度洗脱曲线重现性好的特点。;图16-3 外梯度和内梯度示意图;16-2-2 进样系统;16-2-3 分离系统;16-2-4 检测器; 1.紫外吸收检测器;2.光电二极管阵列检测器：由光源发出的紫外或可见光通过检验池 ，所得组分的特征吸收的全部波长经光栅分光、聚焦到二极管阵列 上同时被检测，计算机快速采集数据，便得到三维时间-色谱-光谱 图。;16-3 液固吸附色谱法; Xm + nSads = Xads + nSm ;16-3-2 液固色谱固定相;16-3-3 液固色谱流动相;16-4 液液色谱法（分配色谱法）;16-4-2 固定相;16-4-3 流动相;16-5 化学键合相色谱法;16-5-1 化学键合固定相;其中，硅氧烷型键合相热稳定性好，不易吸水，耐有机溶剂，能在70℃以下，pH在2～8范围内正常工作，是目前应用最广泛的键合相。 ;2.化学键合固定相的特点;16-5-2 反相键合相色谱法;反相键合相色谱法分离机制：疏溶剂理论(主流理论认为是属于吸附色谱);正相键合相色谱法;16-5-4 离子性键合相色谱法;16-6 离子交换色谱法;;16-6-2 固定相; 对于典型的磺酸型阳离子交换树脂，一价离子的选择性顺序按以下顺序： Cs+＞Rb+＞K+＞NH4+＞Na+＞H+＞Li+ 二价离子的顺序为： Ba2+＞Pb2+＞Sr2+＞Ca2+＞Cd2+＞Cu2+，Zn2+＞Mg2+ 对于季胺型强碱阴离子交换树指，阴离子的选择性顺序为： ClO4-＞I-＞HS04-＞SCN-＞NO2-＞Br-＞CN-＞Cl-＞BrO3-＞OH- ＞HCO3-＞H2P04-＞IO3-＞CH3COO－＞F－ ;（l）多孔型离子交换树脂 主要是聚苯乙烯和二乙烯苯基的交联聚合物，直径约为5～20μm，有微孔型和大孔型之分[见图21-12中（a）和（b）］。 （2）薄膜型离子交换树脂 直径约对30μm的固体情性核上，凝聚1～2μm厚的树脂层，如图中（c）。 （3）表面多孔型离子交换树脂 在固体情性核上，覆盖一层微球硅胶，再在上面涂一层很薄的离子交换树脂，如图中（d）所示。 （4）离子交换键合固定相 用化学反应将离子交换基团键合到惰性载体表面。它也分为两种类型。一种是键合薄壳型，其载体是薄壳玻珠。另一种是键合微粒载体型，它的载体是多孔微粒硅胶。后者是一种优良的离子交换固定相，它的优点是机械性能稳定，可使用小粒度固定相和高柱压来实现快速分离。 ;16-6-3 流动相;16-7 空间排阻色谱法;排阻极限:　比A点相应的相对分子质量大的分子,均被排斥于所有的胶孔之外。;排阻色谱的特点:;16-7-2 排阻色谱的填料和流动相;2.流动相;1.根据相对分子质量选择 ;1937年，蒂塞利乌斯(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白。;电泳：在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。;高效毛细管电泳：以高压直流电场为驱动力、以毛细管为分离通道，依据试样组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离、分析的新型液相分离技术。;高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进：;16-9-1 基本原理;① 毛细管 ;③进样方式;④. 检测器 ;2.分离原理;①电渗流现象：毛细管成分为SiO2 ,与水接触生成硅羟基-Si-OH，当电