激素对血糖的影响课件(研究生).pptVIP

目的要求? 1、掌握血糖测定的原理-葡萄糖氧化酶法 2、掌握大鼠的一般实验方法 3、熟悉血糖含量的调节机制，掌握肾上腺素和胰岛素对家兔血糖含量的影响。 实验原理 ?升糖激素与降糖激素的作用相互对抗又彼此协调，共同维持着血糖浓度的恒定。 肾上腺素是重要的升糖激素，它通过增加血糖的代谢来源，减少其代谢去路而使血糖浓度增高。 胰岛素是惟一的降糖激素，其作用是增加血糖的代谢去路，而减少其代谢来源。一旦胰岛素分泌障碍，必然导致高血糖，甚至出现尿糖。 本实验通过给大鼠注射肾上腺素和胰岛素，对比注射前后血糖浓度的变化，观察激素对血糖浓度的影响。 实验方法 将实验动物――大鼠进行空腹采血后，分别注射胰岛素和肾上腺素，作用一段时间后再分别采血，同时观察注射激素前后的大鼠血糖浓度变化，以验证激素的调节作用。 本实验用葡萄糖氧化酶法测定血糖含量。葡萄糖氧化酶对葡萄糖有特异性催化作用，在有氧参与下，可催化葡萄糖分子中的醛基氧化，生成葡萄糖酸并产生1分子过氧化氢。后者在过氧化酶作用下释放出氧。反应中释放的氧可被4-氨基安替吡林偶联酚所接受，将酚氧化，并与4-氨基安替吡林缩合生成为红色醌类化合物。 其呈色深浅有葡萄糖含量成正比，在505nm处与同样处理的葡萄糖标准液进行比色，计算葡萄糖含量。其反应式如下： 试剂器材 1、胰岛素注射液 2、肾上腺素注射液 3、葡萄糖测定试剂盒－GOD-PAP法 （1） R1（缓冲液）：2×50ml R2（酶试剂）：2×50ml （2）标准液（5.55 mmol/L或100mg/dl）：1×1ml （3）工作液配制：缓冲液1份与酶试剂1份等量混合（在2～8℃可保存30天）。 （4）葡萄糖氧化酶≥10000U/L，过氧华物酶≥1000 U/L，磷酸盐70 mmol/L，酚5 mmol/L （5）4－AAP 0.4 mmol/L，PH7.5。 4、吸管、分光光度计、电热恒温水浴箱、碘酒棉球、酒精棉球、注射器等。 5、麻醉剂：乌拉坦：按大鼠 0.5ml/100g。 操作步骤 （一）动物准备及取血 1、动物准备及空腹采血? 取禁食16小时大鼠一只，过磅称重，并记录体重。 2、取血并测定注射激素前血糖水平 大鼠断尾取血，用血糖仪测定血糖浓度（空腹血糖浓度）并记录“胰前”或“肾前” 3、注射激素 按0.5ml/100g腹腔注射胰岛素或肾上腺素。记录注药时间。 4、注射胰岛素或注射肾上腺素20分钟后，腹腔注射乌拉坦 0.5ml/100g，麻醉，腹主动脉取血，标以“胰后”或“肾后” 。 5、将收集的血液置离心机运转5分钟(3000/min转)，分离出血浆，制备样本管。 （二）、血糖含量的测定 置37℃水浴15分钟，用波长505nm、比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）。 结果处理计算： 样本管吸光度（A） 葡萄糖（mmol/L）＝——————×标准液浓度（5.55） 标准管吸光度（A）（0.24） 葡萄糖（mg/dl）＝mmol/L×18 比较激素对血糖影响的百分数。 讨论思考 1、比较注射激素前、后血糖浓度的变化，这些变化说明什么？ 2、血糖主要有哪些代谢来源与去路？升糖激素和降糖激素的作用机制是什么？ 3、氧化酶法测定血糖的基本原理是什么? 4、血糖浓度测定有何临床意义？ 注意 本实验要求男女搭配,操作大鼠时要耐心大胆,特别注意不能放走大鼠. 大鼠注射激素后要放回大鼠笼! 打开腹腔时不要用厚的劳保手套!换戴一次性手套. 实验结束后统一收集大鼠尸体,仔细清理实验台面,不要留有血迹! * * 实验二十激素对血糖浓度的影响 大鼠，禁食16小时，称重并记录 腹腔注射肾上腺素0.3ml/100g ，记时20分钟 断尾取血，用血糖仪测定大鼠注射激素前血糖水平，并记录胰前或肾前 腹腔注射胰岛素0.3ml/100g ，计时20分钟 按 0.5ml/100g，腹腔注射乌拉坦，麻醉 将麻醉后大鼠捆绑于兔台上固定 将收集血液置离心机运转5分钟(3000/min转)，分离出血浆，制备样本管。 腹腔解剖，暴露腹主动脉，抗凝负压管取血，轻轻振荡，静置 葡萄糖氧化酶法试剂盒，分别测定血糖含量，并记录“胰后”或“肾后” 比较大鼠“胰前”或 “胰后”血糖的差异以及“肾前” 与“肾后”血糖的差异 1ml 1ml 酶试剂 10ul 蒸馏水 10ul 血清 空白管