真核生物转录后的加工.pptVIP

（三）mRNA的内部甲基化 真核生物mRNA分子中有许多甲基化的碱基； 具体的甲基化位点还不太清楚； 主要是：N6-甲基腺嘌呤（m6A）； 推测可能为mRNA的剪切提供信号。 （四）核mRNA前体的剪接（Splicing） 真核不连续基因的初级转录产物中，外显子与内含子交替出现----割裂基因（Split gene）； 转录后把内含子切除而把外显子连接起来产生成熟RNA分子的过程，叫RNA剪接（RNA splicing）。 内含子在真核基因中所占的比例很高，甚至超过99%。 1、核mRNA内含子剪接位点特征 内含子总是由GU开始，以AG结束，其规律称为GU-AG法则（GU-AG rule) 或Chambon法则。 5′端剪接位点(供位)相邻的保守序列：5′-AG↓GUPuAGU-3′ 3′端剪接位点(纳位)相邻的保守序列：5′-(Py)nNCAG-3′ 分枝点保守序列：Py80NPy87Pu75APy95，其中A为百分之百保守，且具有2′-OH。 mRNA前体正确剪接所必需的 2、参与核hnRNA剪接的主要物质 snRNA (small nuclear RNAs，核内小分子RNA） snRNP SnRNA一般≤300碱基，包括U1-U6等； 在自然状态下， snRNAs与相关的蛋白质形成复合 物-SnRNP 在剪接过程中有5种snRNAs 参加，它们是U1、U2、 U4、U5、和U6； snRNP、hnRNA、其他相关蛋白质和剪接因子（Splicing Factor SF），形成呈椭球体的复合物----剪接体（Spliceosome）； hnRNA剪接通过剪接体完成 各种SnRNA功能表 U1 snRNA自我配对形成了多个茎环结构，从而构成了不同的功能区。Sm结合位点是和其他snRNP相互作用的区域。 其5′端有一保守序列：3′-CAUUCAU-5′。 这一序列可与内含子5′端的边界序列互补结合。 U2与分枝点配对 U6与mRNA 5′端配对 U6 snRNA既能与U4配对也能与U2配对 3、剪接机制（简化） 第一次转酯－－左外显子、内含子剪切套索 第二次转酯－－外显子连接、套索状内含子释放 剪接体解体与套索降解同步 4、具体的剪接机制 U1与U2作用使内含子的 5′端和 3′端带到一起 U1通过与 5′剪接点互补而结合 U2识别并结合分支点A U1、U2、mRNA与 U4－U5－U6复合物形成一个完整的剪接体 U1、U4脱离，形成活性剪接体，通过两次转酯反应完成内含子剪切 U1通过与 5′剪接点互补而结合 U2AF与 3′剪接点内含子结合 U2识别并结合分支点A ，并在SF1和BBP帮助下使内含子的 5′端和 3′端带到一起 U4/U5/U6复合物与U1/U2结合 4、具体的剪接机制 U1脱离 U4脱离，U6与U2间发生第一次转酯反应，套索结构形成 第二次转酯反应，U2/U5/U6与套索结构结合 成熟的mRNA释放 续上页 四、其他的内含子剪接方式 1、内含子的分类 根据基因的类型和剪接的方式，通常把内含子分为四类。 I类：线粒体、叶绿体及低等真核生物细胞核的rRNA基因； II类：线粒体、叶绿体的mRNA基因； III类：大多数真核生物核mRNA的基因； tRNA内含子： tRNA基因。 2、剪接方式 方式一：由剪接装置完成（核mRNA内含子） 可供识别的特异序列（GU-AG） 剪接装置由多种蛋白质和核蛋白组成--剪接体； 方式二：自我剪接（两类内含子Ⅰ 、Ⅱ ） 形成特定的二级结构， 具有催化剪接能力的RNA ； 方式三：需要蛋白质酶参与的剪接（酵母tRNA） 前两种剪接都属于转酯反应 3、核酶（ Ribozyme ） 概念： Ribozymes are specialized ribonucleic acid (RNA) molecules with enzyme-like properties. 指具有催化活性的RNA。 ① 一般的酶是纯的蛋白质，而核酶是RNA或带有蛋白的RNA； ②酶仅催化反应，反应前后其本身的质和量都不发生改变；而核酶既是催化剂又是底物，随着反应的进行，本身也消失了。 核酶与酶的区别： 核酶发现的历史： In 1967, Carl Woese, Francis Crick, and Leslie Orgel were the first to suggest that RNA cou