生物化学蛋白质化学(二)3技术总结.pptVIP

第四节　蛋白质的理化性质及其应用 蛋白质分子的大小 1.蛋白质相对分子质量 1万至几万. 2 .蛋白质相对分子质量的测定方法 根据化学组成测定最低相对分子质量 用物理化学方法来测蛋白质的相对分子质量 一、蛋白质两性解离和等电点 蛋白质分子中氨基酸残基的侧链上存在游离的氨基和羧基，因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解离性质，具有特定的等电点（pI）。 溶液pH＝pI时，蛋白质所带正负电荷相等； pH＞pI时，蛋白质带净负电荷； pH＜pI时，蛋白质带净正电荷。 蛋白质两性解离和等电点 主要由肽链中可解离的功能团决定　 两性解离： 蛋白质的等电点PI： 蛋白质等离子点： 蛋白质电泳：用于蛋白质的分离鉴定。 等电点时特点： （1）净电荷为零 （2）一定离子强度的缓冲液：等离子点特征常数 （3）多数蛋白质在水中等电点偏酸 碱性AA/酸性AA 等电点 胃蛋白酶 0.2 1. 血红蛋白 1.7 6 细胞色素C 2.9 10.7 菊糖酶 0.34 8.2 （4）导电性、溶解度、黏度及渗透压都最小。 等电沉淀和白泳： 迁移率与净电荷量、分子大小、分子形状等有关 等电点沉淀和电泳： 等电点沉淀：迁移率与净电荷量、分子大小、分子形状等有关 电泳：带电粒子在电场中移动的现象称为电泳 蛋白质分子在一定pH的溶液中可带净的负电荷或正电荷，故可在电场中发生移动。 不同蛋白质分子所带电荷量不同，且分子大小也不同，故在电场中的移动速度也不同，据此可互相分离。 二、蛋白质胶体性质 １．蛋白质溶液是胶体溶液 维持蛋白质的胶体系统稳定的因素 ①1－100nm大小的质点在动力学上是稳定的. ②某一pH下质点带有同种电荷，互相排斥。可构成双电层 ③质点能与溶剂（水）形成水化层，相互间不易靠拢。 2.蛋白质具有胶体溶液的性质 蛋白质分子的颗粒直径已达1~100nm，处于胶体颗粒的范围。（亲水胶体） 蛋白质具有胶体溶液的性质：布朗运动、丁道尔现象、不能透过半透膜、具有吸附力等。 3、稳定蛋白质亲水溶胶的两个重要因素： 水化膜 ---- 通过氢键与水结合 表面电荷---- 在非等电点状态下，双电层，带 同性电荷蛋白质分子互相排斥。 蛋白质颗粒的表面电荷和水化膜 4.蛋白质凝胶 凝胶具有胀润作用： 分类：（1）可逆性凝胶 （2）不可逆性凝胶 部分破坏水化膜、适当加热和远离等电点 5.蛋白质胶体性质的应用 1、蛋白质是生物大分子—— 不能透过半透膜 2、蛋白质溶液是稳定的胶体溶液—— 具有亲水胶体性质 3、临床应用—— 维持有效循环血量、实验室透析技术 三、蛋白质的变性作用 吴宪教授是中国协和医科大学(原北京协和医学院)生物化学系创始人，曾任中国生理学会会长。他早在20世纪30年代就提出了蛋白质变性理论，在中国和国际生物界有很高的学术地位和广泛的影响。 1.蛋白质变性的本质 蛋白质分子中次级键被破坏，引起天然构象松散。不涉用共价键的断裂（肽键和二硫键），　 蛋白质只有在比较温和的条件下才倾向于稳定。 温和条件指的是：温度为0℃~40℃， 　　　　　　　　pH范围为5.5~9.0， 　　　　　　　　没有有机溶剂。 2.导致蛋白质变性的因素 物理因素 　高温、高压、超声波、剧烈振荡、搅拌、X射线和紫外线等； 化学因素 　强酸、强碱、尿素、胍、去污剂、重金属盐、三氯乙酸、浓乙醇等都能蛋白质变性。 3.常用的变性剂 尿素：与多肽主链竞争氢键；增加非极性侧链在水中的溶解度，从而降低疏水相互作用。 4.变性蛋白质的特点 ①生物活性丧失： ②某些物理化学性质改变： 易与相应的试剂起化学反应； 溶解度降低，易形成沉淀析出； 结晶能力丧失； 分子不对称性加大； 粘度增加； 紫外吸收光谱有所改变； 肽键易被酶水解和消化。 5.蛋白质的复性 当变性因素除去后，变性蛋白质又可重新回复到天然构象，这一现象称为蛋白质的复性。 可逆变性（三、四级结构）与不可逆变性（二、三、四） 不是所有的变性蛋白都能复性。大部分蛋白质变性后不能恢复其原有的各种性质 复性后的蛋白质多数不能完全恢复活力。 四、蛋白质的沉淀 改变稳定蛋白质胶体溶液的条件时，稳定性就被破坏，蛋白质分子相聚集而从溶液中析出，这种现象称为蛋白质的沉淀作用。 沉淀蛋白质的方法 １、盐析法(salting out)：定义，原理，应用 ２、重金属