第2章 肌肉植入试验.pptVIP

动物的选择 短期植入（12周以内）试验首选动物为大鼠、兔。 长期植入（12周以上）可选择兔、狗、羊、山羊、猪等寿命相对长的动物。 我们目前选择的动物为新西兰白兔，体重》2kg 对于短期植入，动物选择与植入周期如下： 植入周期 对于长期植入，动物选择与植入周期如下： 试验目的 采用植入后局部反应试验，评估受试物植入家兔肌肉组织后的刺激和毒性反应。 植入样品的制备 1. 固体材料（不包括粉剂） 植入物应该经过与最终产品相同的制造、处理、清洁和灭菌过程，确保植入物未被损坏并且是无菌的。 规格要求：长10mm，宽1－3mm，边缘光滑。 植入样品的制备 2. 非固体材料（包括粉剂、液体、半固体等） 植入物应该经过与最终产品相同的制造、处理、清洁和灭菌过程。 无菌条件下将样品填充至两端开口的PP、PE、或者PTFE空心小管内，填充物与管口齐平，并防止中间有空气。 对照样品的制备 对照样品的尺寸、形状、表面条件应尽可能与试验样品一致。 对照样品的处理、清洗及灭菌方式应尽可能与试验样品一致。 动物的麻醉 10%水合氯醛耳缘静脉注射，2ml/kg 氯胺酮肌肉注射，50mg/kg 戊巴比妥钠耳缘静脉注射，30mg/kg 实际麻醉过程中，由于动物体质状况等的差异，需适量调整剂量。 固定兔，去除背部肌肉上方约10×20cm面积的兔毛。用碘伏和75%乙醇清洁暴露皮肤。水合氯醛麻醉。 将载有对照样品的穿刺针与表面皮肤呈45o角插入肌肉，当回抽穿刺针时,用细探针将样品留于肌肉中。每只家兔左侧肌肉植入四个对照样品；右侧直接用样品肌肉注射四个点，每点0.2ml。 较大的不能用穿刺针植入的样品，用外科手术方法植入。 植入过程中需注意无菌。 植入完成后注射适量青链霉素防止感染。 植入后临床观察 植入后每天观察动物的一般状况，如 精神状态、被毛光泽、眼神、反应等。 植入后每天观察植入点皮肤反应，有无出血、红肿、坏死和试验样品排出等异常现象。 于四周后，将家兔无痛处死，解剖并观察植入部位有无皮下和肌肉异常病变，在低倍放大镜下观察组织反应（包括出血肿、水肿、囊肿和增生），并记录。 取出脊柱两侧肌肉，切取包裹试样周围0.5～1.0cm的肌肉组织，然后放置于10％福尔马林溶液中固定。 组织学观察 固定之后，肌肉组织标本经修整、包埋、切片等步骤，再进行常规HE染色。 于光学显微镜下观察，比较供试品与对照品周围的组织反应，纤维囊腔厚度，炎症细胞和其他细胞存在情况及试样/组织界面处的其他异常情况等。 组织学评价体系 评分标准 参考文献 医疗器械的生物学评价 第 6 部分: 植入后局部反应试验ISO 10993-6:2007 医疗器械的生物学评价 第12部分: 样品制备和参照样品ISO 10993-12:2007 医疗器械的生物学评价 第 2 部分: 动物保护要求ISO 10993-2:2006 谢 谢 * * 苏州大学卫生与环境技术研究所 植入周期 植入过程 解剖观察 组织保存 phf= 每高倍视野（400×） 脂肪细胞完 全包裹植入物 植入部位大量 堆积脂肪细胞 少量脂肪浸 润和纤维化 极少脂肪浸 润和纤维化 0 脂肪浸润 广泛纤维化 较厚 中等厚度 窄束 0 纤维化 毛细血管广泛 增生并有成 纤维细胞支持 大量毛细血管 增生并有成纤 维细胞支持 4-7支毛细血管 增生并有成纤维 细胞支持 局灶性 毛细血管增生 1-3个小芽 0 新生血管 严重 重度 轻度 轻微 0 坏死 大量堆积 大量浸润 5-10/phf 极少,1-5/phf 0 巨细胞 大量堆积 大量浸润 5-10/phf 极少,1-5/phf 0 巨噬细胞 大量堆积 大量浸润 5-10/phf 极少,1-5/phf 0 浆细胞 大量堆积 大量浸润 5-10/phf 极少,1-5/phf 0 淋巴细胞 大量堆积 大量浸润 5-10/phf 极少,1-5/phf 0 嗜中性粒细胞 4 3 2 1 0 评分 15 重度刺激 9.0 -15.0 重度刺激 3.0 – 8.9 轻度刺激 0.0 – 2.9 无刺激 样品组得分减去阴性