8DNA序列测定试卷.ppt

第八章 DNA序列测定 自然界中物种(生物)的丰富多样性是由其生命本质决定的，物种的本质特征的多样性首先体现在其DNA序列的多样性(病毒为RNA)，这种千差万别的DNA序列正是自然界中形态和功能各异的物种的基石。我们要了解各物种的本质特征，就必需从其DNA的一级结构上开始。因为其DNA的一级结构是各物种生理功能的基础，也是我们对其进行深入研究的出发点。 1977年，Sanger在加减法基础上提出了双脱氧末端终止法测序，其原理如下： 四个反应管中，在DNA聚合酶催化下，以单链DNA为模板，加入单引物、四种dNTP，以及每管中加入双脱氧核糖核苷酸ddA、ddT、ddG、ddC。双脱氧核苷酸(ddNTP)的5’端-OH是正常的，而其3’端-OH则没有，因此能与引物延伸链的3’端连接，而不能连接其后继核苷酸，于是引物链的延伸至此结束，经过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后，根据电泳图谱即可拼出所测DNA序列（即DNA的核苷酸顺序）。 末端终止法测序步骤 一.测序DNA模板制备 二.四种反应液的准备 三.引物与模板退火 四.延伸反应 五.电泳 六.读序 DNA测序方法 末端终止法：最常用。 化学裂解法：研究DNA的二级结构，与蛋白质的相互作用。 杂交测序法：DNA多态性分析。 一. 测序模板的制备 测序可分为单链测序与双链测序，对于未知