基因工程的工具1.ppt

基因工程 思考？ 限制酶、DNA水解酶DNA解旋酶的区别？ * * * 基因工程的概念 又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 基本原理: 基因重组 基因工程的概念 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的新生物类型和产品 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” ①来源： 主要从原核生物中分离纯化出来。 ②种类： 已从近300种微生物中分离出4000种限制酶。 ③作用： 1.能识别双链DNA的某种特定核苷酸序列 2.使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 简称：限制酶 T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 具有特异性。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子， ④作用特点： 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成 ⑤限制酶的识别序列： （一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 例如： 大肠杆菌的一种限制酶EcoRI ,能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶的识别序列： EcoRI限制酶的切割： 中轴线 黏性末端 黏性末端 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 C C C G G G G G G C C C 中轴线 SmaI限制酶的切割： C C C G G G G G G C C C 平末端 平末端 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 产生黏性末端或平末端。 ⑥限制酶的作用结果： 要想从一段DNA中获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就可以合成重组的DNA分子了。 思考? 寻根问底 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是是什么吗？ 原核生物是单细胞生物，一个细胞就是一个个体，与环境直接接触，易受自然界外源DNA的入侵。限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，限制酶会将外源DNA切割掉，但是不会切割自身的DNA，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 ①作用: ②作用原理： 催化磷酸二酯键形成 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来. (二)“分子缝合针”——DNA连接酶 ③类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 相同点 作用 结果 作用 对象 DNA连接酶 DNA聚合酶 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 单个的脱氧核苷酸 形成磷酸二酯键 游离的DNA片段 形成DNA的一条链 形成完整的DNA分子