宏基因标本保存和DNA提取2.docxVIP

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宏基因标本保存和DNA提取2

样本保存和DNA提取文献汇总结合文献(具体文献见下),我个人认为样本的保存方法应为:唾液取样量为3ml,取样容器为冷冻管,里面放有3ml裂解液,裂解液的组成成分为(50mM Tris, pH 8.0, 50mM EDTA, 50mM 蔗糖, 100mM NaCl, 1%十二烷基硫酸钠)取样后放置于液氮罐中保存,等待收样。组织样本和细胞刷样本取出后放置于含有10%DMSO 5%胎牛血清 5mM两性离子缓冲剂的冰冻试管里,并放置于液氮罐中保存,等待收样。细胞刷是连刷带鞘一起冻起来。唾液1唾液样本放置于3ml裂解液中,裂解液的组成成分为(50mM Tris, pH 8.0, 50mM EDTA, 50mM 蔗糖, 100mM NaCl, 1%十二烷基硫酸钠).该样本取样后同一天送至实验室,-20℃保存。2活检组织与细胞刷组织1活检样本和细胞刷样本取出后放置于含有10%DMSO 5%胎牛血清 5mM两性离子缓冲剂的冰冻试管里,并储存于-80℃等待进一步的提取。在DNA提取之前,要对样本进行解冻,细胞刷样本要从鞘中取出。然后对冰冻试管进行涡旋1分钟,12800 rmp 离心2分钟后弃掉上清液。使用超净微生物DNA提取试剂盒(MoBio,Carlsbad, CA)按照说明书进行DNA提取。模拟消化仅包含媒体被用来评估从提取试剂污染。DNA提取时,活检样本用脱100μL超净洗脱缓冲液洗脱,细胞刷样本用25μl洗脱。2将细胞刷的头部剪下并放入装有40ml无菌盐水的试管。将该试管旋转30秒,然后取出细胞刷头部,并将剩余液体以1500RPM离心5分钟;弃去上清液,将沉淀物重新悬浮于1ml无菌盐水中,在液氮中冷冻,并储存于-80℃冰箱中。3(本文献中样本为活检钳所得)4. (本文献中样本为活检钳所得)支持类似方法的文献较多,不再一一列举

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