慢性心衰大鼠下丘脑室旁核内NF-κB和血浆醛固酮、心肌细胞凋亡关系.pdfVIP

慢性心衰大鼠下丘脑室旁核内NF—KB与血浆醛固酮、 心肌细胞凋亡的关系 研究生：吴嫒嫒 专业：内科学 导师：贾如意教授 中文摘要 背景和目的 慢性心力衰竭(CHF)是各种心脏疾病的终末阶段，以心室重构和神经内分泌过度 激活为基本特征的临床综合征。随着社会进入老龄化，心血管疾病发病率的增高， CHF的发病率正逐年上升。下丘脑室旁核(PVN)作为内脏活动和神经内分泌调节的 重要核团，是调控交感神经传出活动最重要的中枢位点和整合部位。研究证实心衰时 PVN内神经化学因素如活性氧簇(reactive oxygenspecies，ROS)、炎性细胞因子 (proinflammatory 重要因素。核因子一KB附F一1(B)广泛分布于全身细胞和组织，在免疫应答和炎症反应 等过程中参与众多因子的基因转录调控过程。近年来研究发现，NF—KB在心衰大鼠重 要的心血管调节中枢PVN内表达明显增多，NF一1(B通过一系列信号转导途径介导CHF 时循环细胞因子的中枢作用，诱导炎性反应和细胞凋亡，参与心力衰竭的发病机制。 慢性心衰时循环中高水平的醛固酮亦可通过中枢效应影响心室重建，其主要通过心肌 的醛固酮受体介导心肌肥厚和心肌重构，其增加是心衰发生的独立的危险因素。本研 究采用冠脉左前降支结扎术致急性心肌梗死制备大鼠cHF模型，饮水中分别给予 NF．1(B拮抗剂毗咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)及选择性盐皮质激素受体拮抗剂依 心衰进程的影响，探讨其相互作用及其对心肌细胞凋亡的调控，为心衰的中枢研究及 治疗探索新的思路。 材料与方法 1．模型制各 成年健康雄性SD大鼠70只，体重250～3009，由山东中医药大学实验动物中心提 1 支结扎术致急性心肌梗死，制备大鼠CHF模型；假手术组只穿线不结扎。CHF组再随 50 mg／1(g 术组(SHAM组，n=10)作为正常对照。治疗组大鼠饮水中分别给予PDTC(1 ／d)，或EPL(30 mg瓜g／d)，治疗持续6周。 2．心衰程度的判断 3．放射免疫法检测血浆醛固酮水平 大鼠颈动脉血注入冰水预冷的EDTA抗凝管中，混匀后离心(4℃，3000印m， lOmin)，取上清置于Tube管中，采用放射免疫法测定血浆醛固酮水平。 4．TuNEL法观察心肌细胞凋亡 制备心肌组织石蜡标本，心肌细胞凋亡采用T切NEL法检测。细胞核呈棕褐色或 者呈棕黄色者为凋亡阳性细胞，光镜下判定其分布情况，每张切片拍摄5个阳性视野。 心肌细胞凋亡率是凋亡阳性细胞数占观察心肌细胞数的比例，心肌细胞凋亡指数 软件分析。 5．westem blot法检测下丘脑室旁核内NF—lcB蛋白表达 提取下丘脑室旁核蛋白后，采用Westemblot检测下丘脑室旁核内NF一1(B蛋白水 平。蛋白采用聚丙烯酰胺变性凝胶方法分离，蛋白经电转膜法转移到硝酸纤维膜上， 扫描系统扫描吸光度，实验组吸光度值与对照组吸光度值比值即为结果。蛋白表达水 平以其与B．actin光密度比值来表示。应用SPSSl3．O统计学软件分析。 结果 建立。 PDTC组，EPL在抑制心肌细胞凋亡、改善心衰症状方面，疗效大于PDTC。 间差异有极显著性(P0．01)，而与SH舢Ⅵ组比较，差异无统计学意义(p0．05) 4．Westem PDTC组组间差异有显著性(P0．05)。 结论 1．CHF组大鼠血浆醛固酮水平明显高于SHAM组。 NF．1出可能在心力衰竭的进程中发挥了重要作用，抑制其活性有可能成为治疗心衰的 一个新靶点。 3．慢性心衰大鼠血浆醛固酮水平与PVN内NF—KB的表达有相关性，心衰时循环 程中心肌细胞凋亡，影响心衰的