症状或疾病经常感染的肠病毒.pptVIP

免疫化學染色(IMMUNOFLUORESCENCE CHEMISTRY ,IHC) 免疫螢光染色分析 (IMMUNOFLUORESCENCE ASSAY,IFA) 免疫螢光染色技術-流式細胞儀 血清學檢驗 第06週：生物科技於刑事科學上的應用：DNA鑑定與微量物證鑑定 * 生物技術 教師:林維莉 第01週：緒論 第02週：生物技術範疇與發展 第03週：生物科產業常用微生物種介紹 第04週：分子生物技術原理與基本應用(一) 第05週：分子生物技術原理與基本應用(二) 第06週：生物科技於刑事科學上的應用：DNA鑑定與微量物證鑑定 第07週：生物科技於醫學上的應用：疫苗開發與製程 第08週：生物科技於醫學上的應用：病原微生物快速檢驗試劑開發與應用 第09週：期中考 第10週：生物科技於醫學上的應用：生物製劑與基因重組藥品開發與應用 第11週：生物科技於醫學上的應用：癌症及藥物治療發展 第12週：生物科技於生殖醫學上的應用：不孕症治療、臍帶血與幹細胞 第13週：生物科技於醫學美容上的應用 第14週：基因轉殖動物發展與應用 第15週：基因改造食品發展與應用 第16週：小組討論 第17週：小組討論 第18週：期末考 分子生物技術原理與基本應用(二) PCR Biochip Norten, Southen, Westen blotting ELISA IFA PCR(POLYMERASE CHAIN REACTION) 利用PCR方法可以人工合成一段特定基因的DNA片段，其原理完全仿照自然界 DNA 合成的步驟，並加以自動化。基本上，這個技術主要包含三個步驟：DNA 分開(denaturation) 引子煉合及引子廷伸作用。 A.DNA 分開：利用高溫加熱而將雙股 DNA分開。當溫度降低，二股DNA便有機會再結合在一起。 B. 引子的煉合：引子是經由 DNA 合成儀合成的，其序列是對應互補於欲進行放大之 DNA片段的序列。通常 PCR 技術所用的引子均為一對寡核甘酸小片段，每個引子各自與一股 DNA 互補。當進行煉合時，藉著溫度的降低，二個引子各自互補性地結合至其單股的 DNA 模板上。 C. 引子廷伸作用：第三步就是藉著 DNA聚合脢進行合成。由引子處，開始由 5‘向3’ 方向，將 dNTP (dATP, dTTP, dGTP, dCTP) 依照模板上的序列，以其互補的核甘酸，逐一接上去，合成了一條新的雙股 DNA。其中引子自己亦包含在新合成的 DNA片段上。 PCR機器與結果 PCR機器與結果 引子 ( PRIMERS )設計 引子 ( primers )設計引子時要注意的事項有: (1) 引子長度通常為 18 – 25 個鹼基長。 (2) GC含量約在 40 – 60 %。 (3) 同一反應中的引子序列不可互補，以免造成自相黏合的情況。 (4) 引子黏合溫度盡量不要相差 5 ℃以上。 (5) 注意模板中所有可能和引子互補的區域，設計時避免含有這些區域。 (6) 如果引子變性了，則至少在 3’ 端有 3 個鹼基以上存在才可能使反應進行。 PCR溫度循環設定 1. 起始高溫分離兩股 DNA，溫度應設定在 95 ℃，時間在5分鐘。時間可隨著 GC 在模版上的比例調升至10分鐘。 2. 高溫分離兩股 DNA通常 94-95℃進行1~2分鐘即可將兩股 DNA 分離，如果 GC 含量過高，可將時間提高至3~4分鐘。 3. Primer黏合，通常 primer 與模版 DNA 黏合的溫度大約是 『Tm 減 5℃』1~2分鐘。 4. 延展，約在70~75 ℃。Taq DNA polymerase 合成速率每分鐘合成 2 kb 左右。若 DNA 過大，合成速率約每分鐘合成 1 kb 左右。 5. 循環次數，一般在25~35次循環就足夠了 6. 最後延展步驟，循環結束後，樣本通常會在 70 – 75 ℃延展5~15分鐘，用意在於填補最後幾次循環的產物。 探索基因的功能及其間的交互作用，是為後染色體組世紀的最重要工作之一，也是從事分子生物及遺傳學研究的基礎。近年來基因晶片技術的崛起，不僅提供了解決上述基因研究上的問題，也帶動了全球基因功能分析自動化的風潮，加速了功能基因研究的進度。 主宰生長、發育、自動調節 (homeostasis)、行為及疾病的發生等錯綜複雜、迂迴曲折的現象，大大地受同源的基因所編譯之核醣核酸及蛋白質所支配，也受到基因的複雜性及基因與周遭環境動態的交互反應所主宰。 蛋白質染色分析 蛋白質染色分析 基因晶片 微陣列系統操作流程 酵素免疫分析法 Enzyme-linked immunosorbent assay(簡稱ELISA）利用抗原-抗體之間專一性鍵結之特性，對檢體進行檢測；配合酵素呈色反應，即可顯示特定抗