怎样选择合适项目的手性柱选读.docVIP

1. 怎样选择合适的手性柱??????对于在文献中未提及的分析物分离，请参照表1选择合适的手性柱。?????????表1---手性柱选择指南 ? 外消旋体 实例 合适的手性柱 ? ? ? 正相 反相 1 简单芳香醇 （1-芳香基）醇例如 1-（4-溴苯）乙醇 RC-SCDP RC-SCDPRC-MCDP 2. β-手性类 必得安??美托洛尔? 烯丙洛尔异丙基肾上腺素 RC-SCDP RC-SCDPRC-MCDP 3. 胺 托品碱布比卡因 ? RC-SCDPRC-MCDP 4 非质子酸和弱酸 苄氟噻嗪 ?三氧甲噻二苯乙醇酮???二氢化苯偶姻 ? RC-MCDP 5. 不对称中间产物 嘧啶 生物碱 ? RC-SCDPRC-MCDP 2. 选择一点开始你的分析??????下面是正相和反相的流动相选择指南: 3. 流动相操作A正相色谱　　在正相模式下，流动相通常由正己烷和异丙醇（IPA）组成。　　图1 给出了异丙醇比例的改变对保留因子(k’)和选择因子（α）的影响。 图1 IPA比例对k’ 和 α的影响 ????流动相：己烷/异丙醇，检测波长，230NM，流速：1.0 ml/ min ????结果表明增加IPA的比例会导致心得安药物的两种对映异构体的k’明显减少。这可以用氢键的作用力减弱来解释。 B 反相色谱　　 极性有机修饰剂????以环糊精为基质的手性柱主要以反相模式为主。因为包结化合物很容易在水相和极性有机相中形成，因此包结化合物通常在水相中有很高的稳定性，加入足够多的有机修饰剂时稳定性会减弱。与只是在水相相比，有机—水相中的样品和环糊精的包结强度会减弱。因此，在反相中，增加流动相中水的比例可能会使保留值减少。????我们公司的手性柱用甲醇和乙腈作为最普通的有机修饰剂。因为相对于甲醇，乙腈和环糊精的空穴有更大的亲和力，所以乙腈的洗脱能力比甲醇大4倍左右。有时，加入两种有机修饰剂，选择性可能不同。目前，很难预测在某一情况下选择哪种修饰剂对分离会有较好的效果。???? 图2 表明了在RC-SCDP5，不同含量的乙腈对分离必得安对映体的影响。 图2 乙腈比例对k’和α的影响 ????流动相：水/乙腈，检测波长，230nm，流速：1.0 ml/ min　　 缓冲溶液????缓冲溶液在对映体分离过程中起重要作用。在流动相中添加少量盐对保留值和分离度会产生明显的影响。????几乎所有盐类都有利于分离，其中的一些效果显著。环糊精手性固定相的缓冲溶液可以是三氟酸、三乙胺—醋酸盐(TEAA)和磷酸盐（TEAP）缓冲溶液。由于TEEA相对腐蚀小和容易调节PH值，它通常作为添加剂。在某些情况下，对映体分离只能在一个PH值下有效地进行。????三乙胺—醋酸盐和三乙胺磷酸盐通常用来提高对映体分离度。它们与延伸在空间中和溶质结构中的胺基基团相互作用而提高分离度。醋酸可以使氨基甲酸盐的一部分羰基基团通过氢键发生作用，那些氨基甲酸盐的孔洞都会有位阻现象 。正常的TEAA的浓度范围应在质量分数0-1.5%，TEAP为0-0.3%。 图3 缓冲溶液对α和Rs的影响 ????流动相：乙腈/缓冲液（0.2%，pH=5.0）=45/55（v/v） 　　 pH????一般用于环糊精键合固定相的缓冲溶液的pH值范围是3.0-8.0。当pH低于3.0时，配基与硅胶连接的硅碳键可能断裂；当pH大于8.0时，硅胶表面将会被损坏。????对于本公司的色谱柱，我们在pH范围为3.8-6.5的不同条件下，研究了pH值对对映体分离的影响。（图4）必须强调的是：每一种物质在分析时都会有最佳的PH值。在最佳的PH的条件下，将会达到非常好的分离效果。 图4 不同的pH对分离效果的影响 ????缓冲溶液的浓度也会影响对映体分离。总体来说是：随着浓度的升高，选择因子（α）和分离度（Rs）将会降低。(图5) 图5 TEAA浓度对k/,α, Rs影响 　　 流速????在正相和反相色谱中，高效液相色谱的柱效和流速有关。然而，在优化分离条件时，却很少考虑到流速。因为人们一般追求短的分析时间。对于环糊精键合手性固定相，流速为0.5-2.0 ml min-1时可实现大部分对映体的分离。????为了在我们的手性柱上得到光学纯对映体的最佳条件，我们研究了在反相中的最佳流速。一般对于半制备手性色谱柱分析，考虑到降低成本和时间，为了实现基线分离，能否找到一个合适的流速很重要。????图6 说明了流速对我们手性柱分离效果的影响 图6流速对t, k/,α, Rs的影响 ????流动相：乙腈：三乙胺-醋酸缓冲溶液=45/55，缓冲液PH为5.0；流速：0.1-1.0 ml min-1 ????结果表明：随着流速的增加，保留时间减少。然而，保留因子(