利用冰核蛋白N末端结构域在大肠杆菌表面展示粘质沙雷氏.PDFVIP

微生物学通报 MAR 20, 2012, 39(3): 318−325 Microbiology China © 2012 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 利用冰核蛋白N 末端结构域在大肠杆菌表面 展示粘质沙雷氏菌脂肪酶 * 陶站华 张搏 (广西科学院生物物理实验室 广西 南宁 530007) 摘 要: 【目的】利用细胞表面工程技术将活性脂肪酶展示于大肠杆菌细胞表面并对展 示脂肪酶的酶学性质进行研究。【方法】将丁香假单胞菌冰核蛋白N 末端结构域序列与粘 质沙雷氏菌脂肪酶编码基因融合, 构建成脂肪酶表面展示载体, 并转化大肠杆菌 BL21 (DE3) 。【结果】重组菌以终浓度0.05 mmol/L 异丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG) 、25 °C 条件 下诱导培养, 16 h 后表面展示脂肪酶活力达到最大值 1 852 U/g 细胞干重。表面展示酶 的最适pH 为9.0, 最适反应温度为40 °C, 表面展示酶热稳定性较游离酶有较大提高, 在 40 °C 孵育 1 h 后仍能保持90%以上的酶活力。【结论】以上结果表明细菌表面展示技术 为脂肪酶固定提供了一个很有前景的替代方法。 关键词: 表面展示, 脂肪酶, 粘质沙雷氏菌, 大肠杆菌 Display of Serratia marcesens lipase on surface of Escherichia coli using N-terminal domain of ice nucleation protein * TAO Zhan-Hua ZHANG Bo (Laboratory of Biophysics , Guangxi Academy of Sciences, Nanning, Guangxi 530007, China) Abstract: [Objective] We constructed an Escherichia coli strain displaying an active lipase on the cell surface by cell surface engineering and characterized the displayed lipase. [Methods] Escherichia coli surface display vector of lipase was constructed by fusing sequence encoding the N-terminal domain of ice nucleation protein with Serratia marcesens lipase gene, and the 基金项目：国家自然科学基金项目(No.; 广西自然科学基金项目(No. 桂科自 0991078) *通讯作者：Tel: 86-771-2503995; : taozhanhua@ 收稿日期：2011-09-10; 接受日期：2011-11-22 陶站华等: 利用冰核蛋白 N 末端结构域在大肠杆菌表面展示粘质沙雷氏菌脂肪酶 319 recombinant vector was transformed into Escherichia coli BL21(DE3). [Results] The highest