酶工程第5章pHTIA对酶反应速度的影响.ppt

第五章 pH、温度、抑制剂和活化剂对酶反应速度的影响;一、pH对酶反应速度的影响; 酶活性的pH曲线;一些酶的最适pH和等电点;2. 最适pH产生的原理;最适pH产生的原理;3.酶的酸碱稳定性;4. pH影响酶反应速度的动力学;（1）游离酶和ES复合物二者的解离体系;B．速度方程的推导;速度方程的推导;速度方程的推导;速度方程的推导;速度方程的推导;C．作图法求常数;a．斜率及截距的再作图法; 当[H+]较高时，上面两式中的 项可以忽略不计，剩下的部分为直线方程。以斜率对[H+]作图得左上图，以截距对[H+]作图得右上图。 当[H+]很低时，上面两式中的[H+]项可以忽略不计，以斜率对 作图得左下图，以截距对 作图得右下图。 ;斜率及截距的再作图法;斜率及截距的再作图法注意事项; 此方法要求pKe1和pKe2及pKes1和pKes2的差距≥3.5个pH单位。 以 对pH作图可求得pKes1和pKes2 以 对pH作图可求得pKe1和pKe2 。 ;Dixon-Webb对数作图法;Dixon-Webb对数作图法;Dixon-Webb对数作图法;Dixon-Webb对数作图法;Dixon-Webb对数作图法;Dixon-Webb对数作图法;Dixon-Webb对数作图法;Dixon-Webb对数作图法;（2）游离酶的解离体系;B．速度方程的推导;速度方程的推导;C．讨论;讨论;讨论;D．作图法求常数;（3）酶—底物复合物解离体系;B．速度方程;C．讨论;D．作图法求常数;二、温度对酶反应速度的影响;2 酶的热稳定性;3 升温使酶反应速度增加;温度与反应速度常数的关系;温度与反应速度常数的关系;温度与反应速度常数的关系;温度与反应速度常数的关系;4 根据温度效应求热力学常数;（1）求活化能;反应中可能有不同的Ea;（2）求解离基团的标准焓（Van’t Hoff作图法）; 测不同温度下某基团的解离常数K，按上式以pK对 作图，得一直线，直线的斜率＝ ，;三、酶的抑制作用和抑制作用动力学;1 酶活性抑制的两大类型;专一性和非专一性不可逆抑制剂;2 可逆和不可逆抑制作用的判断; 曲线1为对照。曲线2为不可逆抑制剂，因有一部分酶被抑制了，所以有活性的酶浓度下降，直线的斜率下降。曲线3为可逆抑制剂，取少量混合液时，在反应体积一定的条件下，混合液的稀释程度较大，酶被抑制的比例减少，相对活性较高；取较多混合液时，混合液的稀释程度较小，酶被抑制的比例较高，相对活性较低。 ; 曲线1为对照。曲线2为不可逆抑制剂，当酶量超过不可逆抑制剂的当量时，才开始出现酶活性，以后增加的酶不受不可逆抑制剂的影响，保持与对照相同的斜率。曲线3为可逆抑制剂,它使酶活性按一定比例下降，此比例与抑制剂浓度有关。;无抑制剂时， 有抑制剂时， ;3 不可逆抑制作用;利用非专一性不可逆抑制剂测定必需基团的数目;专一性不可逆抑制剂的作用;Ks型不可逆抑制剂的特点;修饰位点的判断;b．Kcat型不可逆抑制剂;4 可逆抑制作用动力学;竞争性抑制作用（competitive inhibition）;B.竞争性抑制模式;B．动力学方程推导;a．快速平衡法推导;b．稳态法推导;由①得 ;又 ，将④⑤两式代入得 ;稳态法推导结果;C．讨论;竞争性抑制双曲线图;D．竞争性抑制作图法;竞争性抑制的双倒数作图;b．Hanes-Woolf 作图法;竞争性抑制的Hanes-Woolf 作图;E．求竞争性抑制作用中的Ki值;竞争性抑制双倒数图的斜率对[I]的再作图;b．Km’对[I]的再作图;Km’对[I]的再作图;非竞争性抑制作用（noncompetitive inhibition）;B．动力学方程;C．讨论;ESI能分解出产物的鉴别法;非竞争性抑制中Ki 的特殊意义;D．非竞争性抑制作图法;非竞争性抑制的双倒数作图; 以 对 作图得一直线，随着[I]的增大，直线的斜率增大，横轴截距均为 。 ;非竞争性抑制的Hanes-Woolf 作图;E．求非竞争性抑制作用中的Ki值;b．双倒数式的截距对[I]再作图;反竞争性抑制作用（uncompetition inhibition）;反竞争性抑制模式;B．动力学方程;C．讨论;[S]增加抑制分数i也增加的证明;D．反竞争性抑制作图法;b．Hanes-Woolf 作图法;E．求反竞争性抑制作用中的Ki值;b．双倒数方程横轴截距的再作图;反竞争性抑制;四、酶活化动力学;2 酶活化动力学;活化剂A与底物S形成络合物的模式;B. 速度方程的推导;速度方程的推导;C．用S和A的总浓度表