血液制品应用案例——两步层析工艺提高IVIG产品质量和工艺.PDF

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血液制品应用案例—— 两步层析工艺提高 IVIG 产品质量和工艺收率 1 引言 静脉注射免疫球蛋白(IVIG)主要通过抗体补充和免疫调节作用对多种疾病起到治疗作用。临床应用范围 和适应症非常广泛,包括原发性及继发性免疫缺陷症、各种自身免疫性疾病、细菌性和病毒性感染等。近年来,IVIG 临床应用范围不断扩大,IVIG 用于 Alzheimer’s Disease (老年痴呆症)的治疗临床三期实验正在进行中,未来十 年,全球 IVIG 需求将会以 10-15%的速度增长。最近十年,国际市场 IVIG 价格也逐渐走高,国外血液制品厂家 IVIG 销售额比重已到 50%以上。与此同时,欧盟和美国的血液制品质量标准不断提高,特别是对于微量杂质的控制,如 血清白蛋白(Alb), IgA, IgM 等,含量要求已经达到小于 0.1%的标准。使用传统的 Cohn 乙醇沉淀法,产品纯 度不高,工艺收率偏低。因此,目前全球血液制品六大巨头,普遍使用层析法生产 IVIG,即可以提高经济效益,又 大大提升了产品质量。GE 医疗集团最新的 IVIG 层析工艺,产品质量完全符合欧盟和美国药典要求,产品收率达 60% 以上。 Fraction (I)+II+III/ Low pH Caprylic acid Precipitate Solubilization precipitates UF/DF by AKTA MacroCap Q Flow Capto Q Flow Crossflow, 50K through mode Through mode Formulation Virus filter Low pH 图 1 IVIG 层析工艺流程图 2 实验部分 工艺起始原料采用 Cohn 工艺的组分 I+II+III,经预冷的醋酸钠缓冲液溶解,滴加适量辛酸,大量杂蛋白随 硅藻土一起沉淀,过滤得上清液经两步层析纯化,均采用穿透模式,实验室层析工艺采用 AKTA Avant 150 层析系 统,两根 HiScale16/40 层析柱,分别装填 Capto Q 和 MacroCap Q,柱高均为 20 cm,层析流穿液即为高纯 IgG 溶 液 。实验室工艺使用全自动切向流过滤系统 AKTA Crossflow ,Kvick Start 50K 膜包,浓缩样品浓度至大于 50 mg/ml, 、 然后进行缓冲液置换。后续制剂和病毒去除工艺与原 Cohn 工艺相同。具体工艺流程见图 1。工艺每步骤均需检验 Alb,IgA,IgG,IgM 含量,其它质检指标包括 ACA,PKA,HPLC 聚合体含量,醋纤电泳,抗 A,抗 B,FC 活性,亚 类分布,外观等。 3 实验结果 该工艺总收率大于 60%,每升血浆 IVIG 产量大于 6 g/L。其中两步层析工艺中,每升层析介质能够处理 30-40 l 血浆,整体工艺可以在两天内完成。制备得到 5% IVIG 产品,进行全面质检,结果见下表 1。 表 1 层析工艺 IVIG 产品质检报告 Test Target Electrophoresis cellulose acetate 99.9% HPLC Monomer + Dimer 99.8% IgM (mg/l) 25 (0.05%) IgA(mg/l) 25 (0.05%) Alb(mg/l

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