第二十二-二十三章 免疫学的临床应用-课件.pptVIP

免疫学的临床应用 陈水亲 生化与分子生物学教研室 * 第二十二章 免疫学检测技术 第一节 体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素 一、抗原抗体反应特点 1．高度特异性 由抗原表位与抗体分子中的超变区互补结合所决定的。 2．表面化学基团之间的可逆结合 3．适宜的抗原抗体浓度和比例 抗原抗体结合后能否出现肉眼可见的反应取决于两者适当的浓度和比例。 4．抗原抗体反应的两个阶段 二、抗原抗体反应的影响因素 1．电解质 抗原、抗体通常为蛋白质分子，等电点分别为pH3~5和5~6不等 。 实验中常用0.85%的NaCl溶液，以提供适当浓度的电解质。 2．温度 适当提高反应的温度可增加抗原与抗体分子的碰撞机会，加速抗原抗体复合物的形成。通常37℃是抗原抗体反应的最适温度。 3．酸碱度 抗原抗体反应的最适pH在6~8之间，pH过高或过低，均可直接影响抗原、抗体的理化性质。 第二十二章 免疫学检测技术 第二节 检测抗原或抗体的体外试验 一、凝集反应 （agglutination reactions） 细菌、细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒状物质（如聚苯乙稀乳胶等）与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团现象。 1.直接凝集反应：颗粒性抗原本身直接与相应的抗体反应出现的凝集现象，如红细胞凝集或细菌凝集。 2.间接凝集反应：将可溶性抗原或抗体先吸附在某些颗粒载体上，形成致敏颗粒，然后再与相应抗体或抗原进行反应产生的凝集现象 。 直接凝集反应和间接凝集反应亦常用于溶血性疾病的诊断，如Rh血型不符的新生儿溶血症及药物相关的溶血性疾病。 第二十二章 免疫学检测技术 二、沉淀反应（precipitation reactions） 毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物 。 1.免疫比浊法 利用抗原抗体复合物在液相中形成浊度来测定抗原含量的方法。 2.单向琼脂扩散 常用于血清中免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、C3、AFP等定量测定。 第二十二章 免疫学检测技术 3.双向琼脂扩散 ①检测可溶性抗原或抗体 ②对复杂的抗原或抗体成分进行纯度鉴定 ③免疫血清效价测定 第二十二章 免疫学检测技术 4.免疫电泳 常用于血清蛋白的组分分析 第二十二章 免疫学检测技术 三、免疫标记技术（immunolabeling technique） 将抗原抗体反应与标记技术相结合，以检测抗原或抗体的一类试验方法。 常用的标记物有酶、荧光素、放射性核素、胶体金及化学发光物质等。 1.免疫酶测定法（EIA） 这是一种用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原或抗体的方法。 ①双抗体夹心法 ②间接EILSA 第二十二章 免疫学检测技术 血清检测中：肝癌、骨肉瘤-----血清碱性磷酸酶（ALP）升高。 前列癌-------血清酸性磷酸酶升高。 2.免疫荧光技术 是用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法。 1 2 3.放射免疫测定法 是用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。敏感性可达到pg/ml水平，常用的放射性核素有131I和125I等。 第二十二章 免疫学检测技术 于1977年因创建放射免疫测定法而获得医学诺贝尔奖。 最敏感 4.化学发光免疫技术 是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。 5.免疫胶体金技术 用胶体金颗粒标记抗体或抗原，以检测未知抗原或抗体的方法称免疫胶体金技术。 四、蛋白质芯片技术 是指固定于支持介质上的大量蛋白质构成的微阵列。 6.免疫印迹技术又称Western blotting 第二十二章 免疫学检测技术 蛋白定性定量应用最广泛 第三节 免疫细胞功能的检测 一、免疫细胞的分离 1.外周血单个核细胞的分离 第二十二章 免疫学检测技术 2.淋巴细胞及其亚群的分离和分析 有：免疫吸附分离法 、磁珠分离法 、荧光激活细胞分离仪分离法、抗原肽-MHC分子四聚体技术 第二十二章 免疫学检测技术 流式细胞术可用于分离混合的T、B细胞。用于细胞分离鉴定的最好方法。 二、免疫细胞功能的测定 1.T细胞功能测定 ①T淋巴细胞增殖试验：T细胞受到特异性抗原或有丝分裂原（PHA、ConA）刺激后可发生增殖，可通过以下三种方法检测。 形态计数法 3H-TdR或125Ｉ-UdR掺入法 MTT比色法 第二十二章 免疫学检测技术 ②迟发型超敏反应（DTH）的检测 此方法为体内检测细胞免疫功能的简便易行的皮试方法。 2. B细胞功能测定 抗体形成细胞测定：常用溶血空斑试验。 3.细胞毒试验 培