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第三章 细胞生物学研究方法 ?细胞形态结构的观察方法 ?细胞组分的分析方法 ?细胞培养、细胞工程与显微操作技术 第一节 细胞形态结构的观察方法 ?光学显微镜技术（light microscopy） ?电子显微镜技术 (Electron microscope) ?扫描探针显微镜（Scanning Probe Microscope） 扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope ) 一、光学显微镜技术（light microscopy) ?普通复式光学显微镜技术 ?荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?激光共焦点扫描显微镜技术（Laser Confocal Microscopy） ?相差显微镜（phase-contrast microscope）和 微分干涉显微镜 （differential interference contrast microscope, DIC） 录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 普通复式光学显微镜技术 光镜样本制作 分辨率是指区分开两个质点间的最小距离 (二)荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?原理与应用 ?直接荧光标记技术 ?间接免疫荧光标记技术 ?在光镜水平用于特异蛋白质 等生物大分子的定性定位： 如:绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP) 的应用 (三)激光共焦扫描显微镜技术（Laser Scanning Confocal Microscopy） ?原理 ?应用： 排除焦平面以外光的干扰，增强图像反差和提高分辨率，可重构样品的三维结构。 ?相差显微镜（phase-contrast microscope） 将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞 ?微分干涉显微镜（differential-interference contrast microscope,DIC） 偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成 明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究 活细胞中较大的细胞器 ?录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活 细胞中的颗粒及细胞器的运动 相差显微镜（phase-contrast microscope）  把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各 种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造 上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。 1. 环形光阑（annular diaphragm）：位于光源与聚光器之间。 2. 相差板（annular phaseplate）：物镜中加了涂有氟化 镁的相差板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。 微分干涉差显微镜Differentialinterference contrast microscope （DIC） ? 1952年，Nomarski发明，利 用两组平面偏振光的干涉， 加强影像的明暗效果，能显 示结构的三维立体投影。标 本可略厚一点，折射率差别 更大， 故影像的立体感更 强。 透射电子显微镜transmission electron microscope, TEM 电镜与光镜的比较 电子显微镜的基本构造 （1）电子束照明系统：包括电子枪、聚光镜 （2）成像系统：物镜、中间镜、投影镜等 （3）真空系统 （4）记录系统。 主要电镜制样技术 ? 超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备 ?负染色技术（Negative staining）与金属投影 染色背景，衬托出样品的精细结构 ?冷冻断裂与冷冻蚀刻电镜技术（Freeze etching） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒 和膜表面结构。 快速冷冻深度蚀刻技术（quick freeze deep etching） ?电镜三维重构技术 电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的 具有重要应用前景的一门新技术。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振 分析技术相结合，是