脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6-课件.pptVIP

* 器材准备 半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套, 玻片4个。 脓汁和粪便标本中病原菌的检测（六） 药敏实验结果分析 糖发酵、动力实验结果分析 玻片凝集试验 高压蒸汽灭菌 细菌综合性实验总结 实验报告撰写 细菌感染的检查方法和防治原则（录像） 洗刷 药敏试验结果 用尺子量抑菌圈直径（单位毫米） 常用药敏试验纸片判断标准P21 抗菌药物 纸片含药量 抑菌圈直径(mm) 耐药 中度敏感 敏感 青霉素G(葡萄球菌) 10单位 ≤28 - ≥29 链霉素 10微克 ≤11 12～14 ≥15 庆大霉素 10微克 ≤12 13～14 ≥15 四环素 30微克 ≤14 15～18 ≥19 氯霉素 30微克 ≤12 13～17 ≥18 磺胺 300微克 ≤12 13～16 ≥17 药敏实验结果分析 青霉素 链霉素 庆大霉素 黄色细菌 白色细菌 紫黑细菌 粉红细菌 注：耐药－，中度敏感±，敏感＋。 抗菌素药敏试验纸片法结果 G+球菌对青霉素和链霉素敏感。 G-杆菌对青霉素耐药，对链霉素敏感。 G+球菌和G-杆菌对广谱抗菌素庆大霉素都敏感。 糖发酵、动力试验结果判断 反应现象 结果描述 符号 培养基变色无气泡 分解×糖产酸不产气 ＋ 培养基变色有气泡 分解×糖产酸又产气 ⊕ 培养基不变色 不分解×糖 － 细菌扩散生长,培基混浊 细菌有鞭毛 ＋ 沿接种线生长,培基清澈透明 细菌无鞭毛 － 糖发酵试验结果 平皿水平放置，观察结果 半固体穿刺培养结果 对光上下移动至合适观察位置，观察结果。 肠道杆菌科各菌属生化反应鉴别表 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖 半固体 埃希菌属 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ √ + 志贺菌属 + √ √ +/- -/+ - 沙门菌属 ⊕/+ - ⊕ ⊕ - + 霍乱弧菌 + - + + + + 变形杆菌属 ⊕ - √ - √ + 注： + 产酸或阳性， ⊕ 产酸产气，- 阴性， +/- 多数阳性， -/+ 多数阴性 √ 不确定。 玻片凝集试验 Slide Agglutination Test 在适量电解质存在的情况下，颗粒性抗原(细菌)与特异性抗体混合，如果比例合适，则出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。 取洁净的载玻片一张，将玻片磨面近端设为对照区，滴加生理盐水15ul。远端设为试验区，滴加福氏志贺菌诊断血清15ul， 用接种环分别取粉红色菌苔，约2个小菌落的菌量，研磨于盐水或血清内，混合均匀。 ※载玻片反复倾侧，让菌液充分混 匀，凝集速度更快、结果更清楚。 ※菌液凝集者记为阳性，菌液均匀混浊记为阴性。 玻片凝集结果判定 玻片来回倾侧数次，肉眼观察；2～3分钟内仍不出现凝集者,可认为阴性(－)。 ……;菌液混浊，少量絮状,25%凝集,阳性(＋)。 ……;菌液轻度混浊,絮状凝集块较小,阳性(＋＋)。 ……;菌液澄清,有明显絮片,75%凝集,阳性(＋＋＋)。 实验结果错误的分析 纯培养时，菌落挑错了。 无菌操作不严格，污染杂菌。 接种时未协调好，接种错误。 生物安全警告 本次实验操作，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐着，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。 灭菌 1、药敏试验平板、动力试验半固体琼脂、微量糖发酵管→高压蒸汽灭菌 ! 2、器材收摊入柜前，接种环，接种针必须再次烧灼灭菌！ 实验总结 采用平板划线分离法，从浓汁标本中分离出黄色和白色两种菌落。显微镜下，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌；结合菌落颜色，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌。通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌。 采用伊红美蓝平板，从粪便标