白念珠菌CaFOL1和CaFOL2基因功能的鉴定.pdfVIP

中文摘要 叶酸在体内可以转变为四氢叶酸，充当一碳单位转移酶系统中的辅酶，从而 参与蛋氨酸的合成，嘌呤的合成以及胸腺嘧啶核苷酸的合成等生物途径。白念珠 菌是一种重要的条件致病真菌。白念珠菌CaFOL1 和CaFOL2 基因的ORF 全长 分别是2367bp 和831bp，分别编码含有788 个氨基酸残基和276 个氨基酸残基 的蛋白质。为了研究CaFOL1 和CaFOL2 是否在体内四氢叶酸合成途径中发挥重 要作用，我们使用URA-BLASTER 技术构建了白念珠菌CaFOL1 和CaFOL2 基 因的单等位基因缺失株和双等位基因缺失株。表型分析表明白念珠菌 CaFOL2 双等位基因缺失株（fol2 △/fol2△ ）在不添加外源叶酸时不能存活。我们将白念 珠菌 CaFOL2 基因克隆到白念珠菌表达载体pCR4 上，把构建的pCR4-CaFOL2 质粒转化到CaFOL2 的双等位基因缺失株中。含有pCR4-CaFOL2 质粒的缺失株 能够在不添加外源叶酸的环境下生长。这些结果表明CaFOL2 基因是白念珠菌四 氢叶酸合成所需要的。然而，我们发现即使在外界补充叶酸的情况下，我们无法 得到CaFOL1 双等位基因缺失株，表明 CaFOL1 双等位基因缺失株在外界补充叶 酸的情况下也可能不能生长。因此，我们推测CaFOL1 是白念珠菌生长的必须基 因。 关键词： 白念珠菌； CaFOL1； CaFOL2； URA-BLASTER ABSTRACT Folic acid can be converted to tetrahydrofolate in vivo, which is essential cofactors in one-carbon (C1) transfer reactions and required for the synthesis of compounds such as methionine and purines. Candida albicans is an important clinical fungal pathogens. The open reading frames of CaFOL1 and CaFOL2 genes are 2367 bp and 831 bp in length, and encode proteins of 788 and 276 amino acids, respectively. In order to the study the functions of CaFOL1 and CaFOL2 genes in the tetrahydrofolate synthesis pathway, we used the URA-BLASTER approach to construct heterozygous and homozygous mutants for the CaFOL1 and CaFOL2 genes. Phenotype analysis indicates that the homozygous mutant for CaFOL1 (fol2 △ / fol2 △) can not survive in media without exogenously supplemented folic acid. We cloned the CaFOL2 gene into the Candida albicans expression vector pCR4, and then transformed this plasmid into the homozygous mutant for CaFOL2. This m