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9·80 · 生物化学与生物物理进展 　 　Prog. Biochem. Biophys. 　　　　　　　　2003 ; 30 (6) FRET 技术及其在蛋白质蛋白质分子 相互作用研究中的应用 王进军 　陈小川 　邢 　达 (华南师范大学激光生命科学研究所 , 广州 510631) 摘要 　简要综述了 FRET 方法在活细胞生理条件下研究蛋白质蛋白质间相互作用方面的最新进展. 蛋白质蛋白 质间相互作用在整个细胞生命过程中占有重要地位 , 由于细胞内各种组分极其复杂, 因此一些传统研究蛋白质 蛋白质间相互作用的方法 , 例如酵母双杂交、免疫沉淀等可能会丢失某些重要的信息 , 无法正确地反映在当时 ( 活细胞生理条件下蛋白质蛋白质间相互作用的动态变化过程. 荧光共振能量转移 fluorescence resonance energy transfer , FRET) 是近来发展的一项新技术 , 此项技术的应用 , 为在活细胞生理条件下对蛋白质蛋白质间相互作 用进行实时的动态研究 , 提供一个非常便利的条件. 关键词 　荧光共振能量转移 ( FRET) , 蛋白质蛋白质间相互作用 , 活细胞 学科分类号 　Q6 ( ) 　　荧光成像技术在现代生命科学中是一种非常重 移 即发生能量共振转移 . 下面以 GFP 的两个突 要的实验研究手段. 近年来生命科学领域出现了一 变体 CFP 和 YFP 为例简要说明其原理 : CFP 的发 种崭新技术 : 荧光共振能量转移 ( fluorescence 射光谱与 YFP 的吸收光谱有相当的重叠 , 当它们 resonance energy transfer , FRET) , 利用这种技术能 足够接近时 , 用 CFP 的吸收波长激发 , CFP 的发 够定时、定量、定位、无损伤检测活细胞内蛋白质 色基团将会把能量高效率地共振转移至 YFP 的发 蛋白质间相互作用. 而其中以绿色荧光蛋白 色基团上 , 所以 CFP 的发射荧光将减弱或消失 , (green fluorescent protein , GFP) 及其突变体的应 主要发射将是 YFP 的荧光. 两个发色基团之间的 用最为广泛. GFP 是从维多利亚水母中分离出来 能量转换效率与它们之间的空间距离的 6 次方成反 的 , 受紫外线激发而发出绿色荧光 , 由此得名. 比, 对空间位置的改变非常灵敏[1 ,2 ] . 例如要研究 GFP 的发光基团是环状三肽 , 发光时无需辅助因 两种蛋白质 a 和 b 间的相互作用 , 可以根据 FRET 子 , 无需作用底物. 又据报道 , 与 GFP 融合表达 原理构建一融合蛋白 , 这种融合蛋白由三部分组 的蛋白质在细胞内仍能行使正常的功能 , 所以综合 成 : CFP 、蛋白质 b 、YFP. 用 CFP 吸收波长 以上优点, GFP 就成了一个极好的体内原位可检 433 nm 作为激发波长 , 当蛋白质 a 与 b 没有发生 测蛋白质蛋白质间相互作用的报告分子. 近年来 相互作用时 , CFP 与 YFP 相距很远不能发生荧光 发