郝老师单克隆抗体的制备技术总结.ppt

单克隆抗体的制备 应急处置：洗、挤、消毒 24小时内接种疫苗，5针，28天内打完 咬伤较严重者先注射狂犬病病毒抗毒血清和破伤风杆菌抗毒血清，后接种疫苗。 阅读思考 常规抗体的缺点？ 为什么血清中分离的抗体纯度低？ B2 B3 B1 浆1 浆1 浆1 浆2 浆2 浆2 浆3 浆3 浆3 常规抗体 （多克隆抗体） 抗原 1 2 3 纯度低、特异性差、产量低 1、单克隆抗体 由一个B淋巴细胞增殖分化形成的浆细胞群产生的抗体。化学性质单一，特异性强。 被免疫过的B细胞（浆细胞） 设想： 骨髓瘤细胞 B细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞：既能产生特异性抗体，又能无限增殖 科勒 米尔斯坦 细胞融合技术 细胞培养 抗原 2、单克隆抗体制备过程 B1、B2、B3…多种淋巴细胞 骨髓瘤细胞 （设定为A） + PEG 选择培养基 BB AB1 AB2 AB3…AA 细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。试验用骨髓瘤细胞（缺陷型）只有D途径，没有S途径。 杂交瘤细胞克隆化培养 抗体检测 产生特定抗体的杂交瘤细胞 获取 单克隆抗体体内制备 单克隆抗体体外制备 优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备 将以下单克隆抗体的制备步骤排序 3、单克隆抗体的应用 ①用于治疗疾病和运载药物，如生物导弹 131I 制备甲胎蛋白的单克隆抗体，与药物结合， 定向运输到癌细胞位置。 癌细胞膜具特殊蛋白质，甲胎蛋白、癌胚蛋白。 “生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物 ②作为诊断试剂： 人绒毛膜促性腺激素的单抗 通用名 批准时间 类型 识别抗原 适应症 Muromonab-CD3 1986 mouse CD3 急性肾移植移植排斥 Daclizumab; Basiliximab 1997; 1998 humanized/ chimeric IL-2R(CD25) 急性肾移植移植排斥 Rituximab; Tositumomab; Ibritumomab 1997;2002; 2003 mouse/chimeric CD20 B细胞-非何杰金氏淋巴瘤、 类风湿性关节炎 Alemtuzumab 2001 humanized CD52 慢性B淋巴细胞性白血病 Gemtuzumab ozogamicin 2000 chimeric CD33 急性粒细胞性白血病 Edrecolomab* 1995 mouse EP-CAM 结、直肠癌 Trastuzumab 1998 humanized HER-2 HER-2过表达的转移性乳腺癌 Cetuximab 2004 humanized EGFR 转移性结肠癌、头颈部癌症 Bevacizumab 2004;2006 humanized VEGF 转移性结肠癌,年龄相关性黄斑病变 Infliximab 1998; 2002 chimeric/ human TNF-α 节段性回肠炎、类风湿关节炎, 银屑病性关节炎;强直性脊柱炎 Efalizumab 2003 humanized CD11a 银屑病 Natalizumab 2004 human α4整合素 多发性硬化症 Omalizumab 2003 humanized IgE 过敏性哮喘 Abciximab 1994 chimeric GPⅡb/Ⅲa 冠心病血小板 Palivizumab 1998 humanized RSV 呼吸道合胞病毒感染 科勒 米尔斯坦 杂交瘤技术是上世纪方法学上的一个重大突破，开创了大量生产具有专一特异性的单克隆抗体的新纪元。 1984年米尔斯坦和柯勒被授予诺贝尔生理学或医学奖。 骨髓瘤细胞（缺陷型） 多种细胞 筛选 杂交瘤细胞 B淋巴细胞（多种） 选择培养基 特定抗原注射动物引起免疫反应 加PEG 克隆化培养，抗体检测 筛选 产生特异性（所需）抗体的杂交瘤细胞 单克隆抗体 体内培养 体外培养 2、单克隆抗体的制备过程 特异性强、灵敏度高，可大量制备。 脾脏提取 优点 既能大量繁殖又能产生专一抗体 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * Therapeutic mAbs are now big business. infliximab (α TNF-α) and rituximab (α CD 20) each had ov