毛细管电泳芯片的设计技术研究.DOC

第一章 毛细管电泳芯片概论 §1.1 概述 1.1.1生物芯片技术 随着人类基因组计划（Human genome project）的逐步实施以及分子生物学相关学科的迅猛发展，越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定，基因序列数据正在以前所未有的速度迅速增长。然而,怎样去研究如此众多基因在生命过程中所担负的功能就成了全世界生命科学工作者共同的课题。为此生物芯片，一项将计算机芯片制作技术与生命科学研究相结合的新兴技术应运而生了！ 生物芯片技术是将生命科学和医学研究中所涉及的许多不连续的分析过程（如样品制备、化学反应和分析检测）通过采用微电子、微机械、特殊化学处理、生物操纵等工艺和过程集成到芯片中，使之连续化、集成化和微型化。这一技术的成熟和应用一方面将为下个世纪的疾病诊断和治疗、新药开发、分子生物学、航空航天、司法鉴定、食品卫生和环境监测等领域带来一场革命；另一方面生物芯片的出现为人类提供了能够对个体生物信息进行高速、并行采集和分析的强有力的技术手段，因而必将成为未来生物信息学研究中的一个重要信息采集和处理平台。因此，美国商业界的权威刊物《Fortune》在97年3月刊中以封面为题撰文对生物芯片技术的重要性作了如下深刻的阐述：“微处理器在本世纪使我们的经济结构发生了根本改变、给人类带来了巨大的财富、改变了我们的生活方式。然而，生物芯片给人类带来的影响可能会更大，它可能从根本上改变医学行为和我们的生活质量，从而改变整个世界的面貌。” 基因芯片是生物芯片研究中，最先实现商品化的产品。目前，比较成熟的产品有检测基因突变的芯片，检测细胞基因表达水平的表达基因芯片。?根据检测方法的不同，DNA芯片分为毛细管电泳型和DNA探针阵列型。 毛细管电泳芯片是以毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）序列分析为基础的。在序列分析时，先获得序列中不同长度的DNA片段，然后用毛细管电泳检测这些片段，从而得到序列信息。 将集样品制备、基因扩增、核酸标记及检测高度集成化为一体的便携式生物分析系统称为芯片实验室，它最终的目的是实现生化分析全过程全部集成在一片芯片上完成，从而使现有的许多烦琐、费时、不连续、不精确和难以重复的生物分析过程自动化、连续化和微缩化，属未来生物芯片的发展方向。其结构示意图如图1.1所示【1】?。 图1.1 芯片实验室结构示意图 到目前为止，在对DNA和蛋白质进行分析的各种技术中，最令人关注的当属以生物芯片技术为基础的亲和结合分析、毛细管电泳分析和质谱分析等。在这些技术的基础上，再结合采用生物芯片技术的样品制备方法（芯片细胞分离技术）和生化反应方法（如芯片免疫分析和芯片核酸扩增技术）等，许多研究机构和工业界都已开始构建缩微芯片实验室。 生物样品的分析通常包括样品制备、生物化学和分子生物学反应、结果检测和数据处理等过程。将其中一个步骤或几个步骤微型化集成到同一芯片上，就能够获得具有特殊功能的生物芯片：如用于样品制备的过滤分离芯片、介电电泳芯片和细柱式DNA萃取芯片；用于生物化学反应的生物芯片，主要是应用大量扩增、复制样品的PCR技术，包括帕尔帖电热PCR芯片、薄膜多晶硅加热套内置式PCR芯片、恒温区间连续流PCR芯片；将样品制备和扩增反应集成的坝式微过滤芯片；用于基因突变检测和基因表达的毛细管电泳芯片、寡核苷酸探针芯片、杂交测序芯片、DNA微阵列芯片和用于药物筛选的高通量微米反应池芯片等。【2】 2毛细管电泳芯片的定义 毛细管电泳芯片是在常规CE的原理和技术的基础上，利用微型制造技术在平方厘米级大小的芯片上刻蚀出扁平的管道和其它的功能单元，通过不同的管道网路、反应器、检测单元等的设计和布局，实现样品的进样、反应、分离和检测，是一种多功能化的快速、高效和低耗的微型实验装置。【3】 1.1.3毛细管电泳芯片的优点【3，4】 毛细管电泳芯片的管长一般为1～10cm ,宽为10～50μｍ, 深为10μｍ左右，而CE的毛细管几十厘米长，内径多为75μｍ，毛细管电泳芯片的截面积比CE小，比表面积大，所以毛细管电泳芯片比CE散热速度快，即毛细管电泳芯片中“焦耳热”的影响比CE小。实际上，毛细管电泳芯片中由焦耳热引起的展宽在一般情况下可以忽略不计。因而可以以较高的分离电压实现对样品的快速分离。 由于技术等原因，现阶段所制作的毛细管电泳芯片毛细管槽的截面实际上呈不太规则的长方形或梯形，但由于毛细管槽的截面积很小，所以可以近似的按圆形来处理。 由CE公式 其中ｔi：i离子的迁移时间；LD：有效管长；Ｖi：i离子的运动速度；η：粘度；E:场强；ｒ：管的内径；ｚi：i离子所带的电荷。 假定CE管内的场强与毛细管电泳芯片管内的场强相同，由于毛细管电泳芯片的管内径和有效管长均小于CE，因而样