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开题报告 李益琛 刘文文 刘筱羽 王雪 研究背景 脑缺氧对脑组织的损伤表现在细胞功能的异常，比如细胞的分泌导致多方面异常，而分泌又会对相应身体机制有影响，比如，生物钟。 脑中生物钟的代表物质是褪黑素。 Lerner(1960)首次在松果体中分离出一种激素，由于这种激素能够使一种产生黑色素(melanin)的细胞发亮，故取其字首Mela；同时由于它从5-羟色胺(serotonin)衍生而来，故取其后缀tonin，因此，这种松果体激素取名为Melatonin(褪黑激素)。 褪黑激素(Melatonin)主要是由哺乳动物和人类的松果体产生的一种胺类激素。褪黑激素的分子式为C13N2H16O2，分子量232.27，熔点116℃～118℃，化学名称为N-乙酰基-5-甲氧基色胺(N-acetyl-5-methoxytryptamine)。 褪黑素(melatonin，MLT)是松果体合成分泌的一种叼}垛类激素，它除了具有镇静、抑制性腺、调整生物钟外，还有强大的清除氧自由基、抗氧化作用，以及保护DNA、膜脂质、线粒体免受氧化损伤和维持神经胶质细胞功能。 芳香烷基胺一N一乙酞基转移酶 (arylalkylamine一N-aeetyltransferase，AANAT)、 经基11引睬一O一甲基转移酶 (hydroxyindole一O-methyltransferase，HIOMT) 是其合成的最后两个酶，其中AANAT是限速酶。 随着人们对松果体研究的深入，松果体在疾病中的作用越来越被人们所重视。近来国内有学者注意到成年人或鼠脑损伤后松果体功能存在变化，但研究结果却大相径庭，人们分别观察到缺血性脑血管病及老年颅脑损伤患者血清褪黑素水平降低或升高，然而就其原因作者们均未作深刻探讨。 褪黑激素在体内含量极小，以pg(1×10-12 g)水平存在。近年来，国内外对褪黑激素的生物学功能，尤其是作为膳食补充剂的保健功能进行了广泛的研究，表明其具有促进睡眠、调节时差、抗衰老、调节免疫、抗肿瘤等多项生理功能。 目前国外MLT在儿科领域已经进入临床试验阶段，而国内MLT仍仅作为改善中老年人睡眠的保健品。现己公认，褪黑素水平下降是阿尔茨海默病(Alzheime:DISease，AD)的一个重要原因。 缺氧（hypoxia ）是指因组织的氧气供应不足或用氧障碍，而导致组织的代谢、功能和形态结构发生异常变化的病理过程。缺氧是临床各种疾病中极常见的一类病理过程，脑、心脏等生命重要器官缺氧也是导致机体死亡的重要原因。另外，由于动脉血氧含量明显降低导致组织供氧不足，又称为低氧血症(hypoxemia ）。 研究意义 通过本次实验，我们小组准备进一步观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后外周血中MLT水平的变化，探讨松果体功能改变在HIBD中的意义，期望为MLT用于临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)以及基因治疗HIE奠定基础。 研究目的 缺氧对脑组织生化异常变化之褪黑素分泌作用，通过研究缺氧致使小鼠褪黑素变化，说明褪黑素从合成上的改变，并为褪黑素应用于治疗HIE提供理论依据的基础。 研究内容 通过建立大鼠HIBD模型，测量脑组织外周血中MLT水平的变化 实验动物： 采用无特定病原体(specifiepathogenFree，sPF)级7日龄远交群（sprague一Dawley，SD）大鼠，雌雄不分，体重11一149 研究方法和手段 1、新生SD大鼠的分组及缺氧缺血模型建立 7d 新生SD 大鼠8 窝,每窝选取6～9 只，按1∶1 随机分为HIBD组、假手术组。将新生鼠置于加盖的烧杯内注入适量的乙醚，2～3 分钟麻醉成功。 将新生鼠颈部常规消毒,颈正中作一长约0.7cm切口。对HIBD组，切开皮肤后用血管钳分离颈前肌群至气管,再用眼科镊分离气管左侧暴露颈动脉三角,可见搏动的颈动脉且有静脉及迷走神经伴行,分离出颈总动脉后用6-0号无创缝合线双重结扎左颈总动脉,检查断流成功后缝合切口。 术后将手术鼠放入自制的37℃恒温水浴箱中的密闭缺氧箱内,向缺氧箱内通入含8% 氧气和92% 氮气的混合气体，120 分钟后返回母鼠身边继续哺乳喂养。假手术组术中分离颈前肌群至气管后不结扎左颈总动脉，直接缝合切口并不作缺氧处理。 注意麻醉时间勿太长，术中操作应精细，尽量减少出血及剌激周围组织，术后要擦干新生鼠身上的血痕，以防止母鼠因气味陌生而拒绝哺乳。 假手术组仅分离出左颈总动脉，置线后不予结扎，缝合皮肤。 60只新生大鼠随机分成10组，每组6只，实验组 T1:HIBD后0小时，TZ:HIBD后6小时，T3:HIBo后12小时，T4:HIBD后24小时，T5:HIBo后48小时;对应假手术组:S!，S2，S3，