牡丹籽粕中提取芍药苷方法的解决方案.ppt

牡丹籽粕中提取芍药苷方法的研究 菏泽尧舜牡丹生物科技有限公司 主要内容 课题选择的背景 一 研究的意义 二 研究的内容 三 经济效益分析 四 专利及查新报告 五 一、课题选择的背景 本项目研究目的是开发油用牡丹籽粕的附加值。 首先对牡丹籽粕中生物活性成分进行分析评估，探索开发利用的方法。从而延长牡丹产品的产业链，以高新技术促进牡丹生物产业发展。 本课题以本公司生产牡丹籽油后的牡丹籽粕为原料，对其水醇提取液进行了高效液相、质谱分析首先确定了含有芍药苷成分，进一步确认了芍药总苷含量约在2.65mg/g。后续研究了从牡丹籽提取芍药苷的提取工艺及纯化工艺。 二、研究的意义 芍药苷是来源于赤芍白芍的一种药物，是一种单萜类糖。国内外研究其药理作用广泛： 具有扩张血管、扩张冠脉血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板凝聚等多方面作用， 镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、 利尿、抗应激性溃疡病。 市场产品有芍药苷胶囊，主治类风湿性疾病，疗效非常显著。 芍药苷传统的主要来源是毛茛科植物芍药的根，含量以赤芍为高，含量约3%。以植物根部为主，一次性利用，且植物生长周期为5-6年，生产周期长。本课题以牡丹籽粕为芍药苷的来源，每年都可以收获种子，且种子产量高，有明显的经济效益和社会效益。 我国是世界上最大的牡丹种植国家，研究表明，牡丹籽亩均产籽300-400公斤，目前产量高达5万吨左右，居世界第一位。目前牡丹产业化利用报到较少，主要集中于牡丹籽油的生产工艺、质控和用途研究方面。而牡丹籽油生产过程中产生的籽粕的开发利用未见详细的研究报到。 三、研究内容 牡丹籽粕中芍药苷类成分的分离 纯化和结构鉴定 牡丹籽粕中芍药苷类的含量分析 牡丹籽粕中提取芍药苷的工艺研究 芍药苷提取液的纯化研究 三-1、牡丹籽粕中芍药苷类成分 的分离纯化和结构鉴定 取1 Kg牡丹饼粕过40目筛，用30%乙醇冷浸提取3次，合并提取液，减压浓缩，再用高浓度乙醇沉淀，取上清液浓缩回收溶剂，得到480 mL混悬液。过HPD-200A型大孔吸附树脂柱，用50%乙醇洗脱。流出液合并后，各洗脱馏分用半制备型高效液相色谱分离纯化。 三-1、牡丹籽粕中芍药苷类成分 的分离纯化和结构鉴定 各洗脱馏分用半制备型高效液相色谱分离纯化，分别得到主要的化学成分，包括化合物1（380 mg）、2（700 mg）、3（100 mg）、4（400 mg）、5（320 mg）和6（140 mg）。 图1 饼粕提取物的LC-MS色谱图 三-1、牡丹籽粕中芍药苷类成分 的分离纯化和结构鉴定 对提取物进行LC-MS分析，经质谱碎片分析得出：化合物1和3为同分异构体，相对分子质量为642，2和4为同分异构体，相对分子质量为480。 对6种化合物进行H-NMR分析（谱图见附表），结合文献初步确定了这6种化合物的化学结构，它们分别是：化合物1： 6′-O-D葡萄糖芍药内酯苷；2：芍药内酯苷； 3： β-gentiobiosylpaeoniflorin；4： 芍药苷；5： 苯甲酸；6：芍药苷元。 6种化合物H-NMR图 1、 6′-O-D葡萄糖芍药内酯苷 5： 苯甲酸 3： β-gentiobiosylpaeoniflorin 6：芍药苷元 4： 芍药苷 2芍药内酯苷 三-2、牡丹籽饼粕中芍药苷类 的含量分析 以上述试验中制备出的6种成分的纯品为对照品，建立了一种直接测定牡丹籽饼粕中芍药苷类成分的HPLC分析方法，其色谱条件如下： 流动相：A：500 μL/L甲酸水溶液； B：甲醇含500 μL/L的甲酸； 梯度洗脱程序：（min/B%）0/40，4/40， 8/60，15/60，16/40，20/40； DAD检测器，检测波长：230 nm； 流速：0.8 mL/min； 温度：30℃； 进样量：5 μL；峰面积外标法定量。 三-2、牡丹籽饼粕中芍药苷类 的含量分析 精确称取1、2、3、4、5、6号物质的对照品溶于40%甲醇中，配制成一定浓度的混合对照品贮备液，取上述对照品贮备液，用40%甲醇稀释合适的倍数，按上述的色谱条件重复进样分析（n = 5），以评价方法的精密度。 取上述对照品贮备液，用40%甲醇稀释，配制不同浓度的系列标准溶液，按上述的色谱条件分析，以进样质量为自变量（X