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兰卅l大学硕士研究生论文 应用分子生物学技术研究小鼠急、慢性肝损伤 摘 要 小鼠酒精性肝损伤分子生物学检测指标的探讨 目前酒精性肝损伤的发病率呈逐年上涨趋势，对酒精性肝病的诊断需要多种 指标相互验证。本文拟探讨若干基因作为肝损伤分子生物学检测候选指标的可行 性。首先取小鼠120只随机分成正常组和肝损伤模型组，连续给与模型组小鼠灌 喂酒精。于第6周、第12周检测到模型组小鼠血清Aul活性有所升高，TP、 ALB含量显著下降，而GLB含量无明显变化；肝组织病理切片显示肝细胞结构 被破坏，有脂肪变性以及淋巴细胞浸润等特征。提示酒精诱导的小鼠肝损伤模型 成立。然后分别提取模型组和正常组小鼠肝组织RNA，经SMART技术反转录 ICAM一1、IL．10、OPN 6个基因片断。结果显示以上基因在模型组中的表达均显 增加趋势。因此，这些基因可作为用分子生物学方法检测酒精性肝损伤的候选指 标。本实验为在分子水平上进行肝损伤的检测提供理论依据。 用SSH方法构建CCh诱导小鼠急性肝损伤组织与正常肝组织差异表达基因的 cDNA文库 本文利用抑制性消减杂交方法构建了CCI。诱导小鼠急性肝损伤组织与正常 肝组织差异表达基因的cDNA文库。首先建立CCl4诱导急性肝损伤的小鼠模 型：小鼠腹腔注射40％CCh：花生油溶液(40：60)，16h后检测到血清中AST、 』6止T活性均明显升高，TP、ALB含量显著下降，GLB含量无明显变化；病理切 片显示肝细胞有气球样变性、小叶结构模糊、血管充血、部分淋巴细胞浸润。提 示CCI。诱导的急性肝损伤小鼠模型成立。然后我们在该模型中寻找与正常鼠肝 组织差异表达的基因并构建消减cDNA文库：(1)分别提取肝组织mRNA，用 SMART技术反转录成cDNA，经过酶切、接头连接、两轮消减杂交及两轮抑制 性PCR，使得差异表达的cDNA片段得以富集；(2)用T／A克隆构建差异表达 基因的cDNA消减文库；(3)随机挑选60个阳性克隆进行PCR鉴定，其中有 55个克隆有200．750bp的插入片断，证实建库成功。该cDNA文库的构建为进 一步筛选出代表急性肝损伤组织与正常肝组织差异表达的cDNA片段，并对这 些cDNA进行序列测定、序列同源性分析以及进行完整基因的克隆、鉴定奠定 了基础；为基因药物和诊断基因芯片的研发提供了依据。 关键词： 酒精性肝损伤、CCl4诱导的急性肝损伤、基因的差异表达、cDNA 文库、抑制性消减杂交(ssH) 兰州大学硕士研究生论文 应用分了生物学技术研究小鼠急、慢性盯损伤 Abstract onseveralmolecularindexesin ofaIcohoIicliver inmice Study diagnosis disease be Themicemodelofalcoholicliver shouldset toevaluateseveral injury up couldbe forcandidateindexesfor alcoholicliverdisease． genes adapted diagnosing 12 Themiceweretreatedwithalcoh01．After6weeksand withthe weeks．compared normalmice．the ofalanine serumin activity aminotransferase(ALT)in mice