2013QH 2.2.动物细胞融合和单克隆抗体的制备.ppt

动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指 或 动物细胞形成一个细胞的过程 B淋巴细胞与抗体的关系 动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 骨髓瘤细胞 * * * 学习目标： 举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用 学习重点和难点： 单克隆抗体的制备和应用 提问： 哪种植物细胞工程技术可以突破不同生物之间的生殖隔离障碍，培育出新的作物类型？　　　　　 植物体细胞杂交技术 你能回忆出植物体细胞杂交的过程吗？ 植物体细胞杂交技术过程图 动、植物细胞在结构上有何区别？ 无细胞壁 全能性受限制，不能发育成杂种动物 动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同： 不需去除细胞壁 不能发育成新的动物个体 动物细胞融合 融合后形成的单核细胞称为杂交细胞 多个 两个 请同学们阅读课本P52动物细胞融合 细胞A 细胞B 杂种细胞 生物：灭活的病毒 物理法 化学法 动物细胞体外融合 诱导方式 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 先质融合，再核融合 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性） 问题讨论 2、动物细胞融合有什么意义？ 1、不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 病毒一般对生物体是有伤害的。不灭活的病毒会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 灭活的病毒 物理或 化学方法 丧失感染活性 保留融合活性 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。主要用于制备单克隆抗体 有何同？不同？ 动物细胞融合 植物体细胞杂交 植物、动物细胞融合的比较 步骤 用途 诱导方法 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 主要用于制备　 单克隆抗体 获得杂种植株 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒　　 物理（离心、振荡、电激） 化学（聚乙二醇） 使细胞分散后诱 导细胞融合 去壁→诱导融合→组培 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 细胞全能性 　　由单个B淋巴细胞经过无性繁殖 （克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 单克隆抗体 特点： 特异性强、灵敏度高 抗体是由何种细胞产生的？ 2. 抗体是如何产生的？主要分布于哪里？ ？ 单克隆抗体 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 浆细胞产生抗体。主要存在于血清中。 . . 传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？ 怎样解决这个问题？ 单克隆抗体 传统制备抗体的缺点： 传统制备抗体的方法是： 产量低、纯度低， 且抗体的特异性差、灵敏度低。 如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ （怎样才能大量生产单克隆抗体？） 单克隆抗体 提示： 1 .什么样的细胞可以产生抗体？ 2 . 什么样的细胞可以无限增殖？ 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 杂种细胞 单克隆抗体 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 （只考虑两两融合）培养液中融合细胞几种类型？ 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞 B淋巴细胞--- B淋巴细胞 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 多种杂交细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞 单克隆抗体 注射到小鼠体内 体外培养 2、单克隆抗体的制备过程 第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。 第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。 杂交瘤细胞有何特点？ 特异性强，灵敏度高 免疫小鼠 培养骨髓瘤细胞 融合 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 选择培养基上培养 专一抗体检验阳性 专一抗体检验阳性 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体 克隆杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞 多种杂交细胞 杂交瘤细胞有何特点？ 本过程利用的那些技术？ 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 是否注射抗原 （只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几种融合细胞？ 两次筛选的目的分别是什么？ 2、单克隆抗体制备过程 与传统制备的抗体相比具有什么特点？ ①诊断疾病 单克隆抗体的应用 ②用于治疗疾病和运载药物 （导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤） （位置准确、疗效高、副作用小） 两个过程 动物细胞融合过程 单克隆抗体制备过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法 一个新细胞 一个优势 课堂小