利用脂解酵素催化分割程序制备具光学活性之非类固醇 - 南台科技大学.doc

利用脂解酵素催化分割程序製備具光學活性之非類固醇消炎前驅藥(Ⅱ) 張春生*、莊嘉榮、曾詩雯、劉昆輔 NSC 91-2214-E-218-006 摘要 藉由已發展之Naproxen 三氟乙硫酯動態動力分割系統，將其拓展至其他系列醇類系統之酯類前驅藥合成，如hydroxyalkyl 酯類及morpholinoalkyl 酯類前驅藥，進一步了解此系統之廣用性，探討利用不同直鏈烷基碳數之醇類對於脂解酵素催化Naproxen 三氟乙硫酯進行動態動力分割轉硫酯化反應其酵素活性及鏡像選擇性之影響。 粗酵素系統下，比較不同直鏈碳數hydroxyalkyl醇類與Naproxen酯化反應，相對於Naproxen 三氟乙硫酯之轉硫酯化反應，其轉硫酯化反應之酵素鏡像選擇性隨morpholinoalkyl醇類之烷基直鏈碳數增加而增加，與酯化反應中酵素鏡像選擇性隨醇類之烷基直鏈碳數改變趨勢相反，其鏡像選擇性在轉硫酯化反應隨醇類之烷基直鏈碳數增加而增加且大於50，與酯化反應趨勢相反。為克服動力分割的最高只有50%轉化率，利用加入三辛基胺等有機鹼進行動態動力分割，使得轉化率可突破50%，對於morpholinoalkyl酯類前驅藥在此系統有50左右鏡像選擇性，而hydroxyalkyl 酯類則在烷基碳鏈數超過四時其鏡像選擇性大幅下降，同時了解有機鹼三辛基胺會增加水解旁反應而不利轉酯化反應。 關鍵字: Naproxen, 脂解酵素, 動態動力分割, 前驅藥 前言 對於動力分割(kinetic resolution)而言，不管是利用酯化或轉酯化等酵素法或是結晶法，除非剩下之其他對掌異構物能夠自我消旋化或進行立體異構反轉，否則理論上僅可獲得50%之目標對掌異構物。利用上述已開發之酵素酯化動力分割及合成製程，將反應基質由酸變成酯或硫酯除了大幅提升於有機溶劑之飽和溶解度一萬倍以上，以Candida rugosa脂解酵素為觸媒，利用有機鹼催化基質Naproxen硫酯類產生自我消旋進行動態動力分割(dynamic kinetic resolution)，成功地使產物前驅藥產率突破50%，並維持高的光學活性(Chang et al. 1998, Chang et al. 1999ab)。 最近，在醫藥研究方面，藥物經皮吸收方式引起高度的興趣，肇因於其有數項優於傳統口服投藥的優點。例如：經皮吸收的方式可比在口服安全劑量下，針對軟組織或關節發炎及疼動部份，提供局部較高之治療劑量。由於藥物本身之物理化學性質與皮膚之屏障保護功能限制了許多藥物對皮膚的滲透，因此必須發展不同的策略來加強藥物對皮膚之滲透，其中較特別者為前驅藥也已被應用在此方面，由於成功的經皮前驅藥需具備最佳之分佈係數(partition coefficient)，即適當的親水與親脂性，Rautio在這方面以化學合成法得到piperazinyl、aminoacyloxyalkyl及methylpiperazinylacyloxyalkyl等系列之Naproxen及ketoprofen酯類前驅藥(Rautio et al. 1998, 1999, 2000ab)，且顯示對皮膚有優於原母藥之滲透性。 藉由已發展之Naproxen 三氟乙硫酯動態動力分割系統，將其拓展至其他系列醇類系統之酯類前驅藥合成，如hydroxyalkyl 酯類及morpholinoalkyl 酯類前驅藥，進一步了解此系統之廣用性，探討利用不同直鏈烷基碳數之醇類對於脂解酵素催化Naproxen 三氟乙硫酯進行動態動力分割轉硫酯化反應其酵素活性及鏡像選擇性之影響。 研究方法 定量分析條件建立 　　基於定量分析之需求，將酯類產物之HPLC之分析條件建立，利用Dacicel OD-H及 OJ管柱及適當流動相組成，對反應物與產物加以分離定量。 篩選不同碳鏈長度醇類對反應速率及鏡像選擇性之影響 選擇碳鏈數二至四之hydroxyalkyl morpholine與碳鏈數二至六之直鏈烷基雙醇類為醇類基質與(R, S)-Naproxen 之三氟乙硫酯利用有機鹼進行轉酯化反應之動態動力分割，合成(S)-Naproxen 酯類前驅藥，探討對系統之酵素反應性及鏡像選擇性之影響。 結果與討論(R, S)-Naproxen 之三氟乙硫酯進行轉硫酯化動力分割，隨著碳鏈數增加其轉硫酯化速率增加而其水解旁反應速率則處於偏低狀態，此部分的趨勢與(R, S)-Naproxen進行相同醇類之酯化動力分割之趨勢相反，在酯化部份其酯化速率則隨碳鏈數增加其酯化速率有降低趨勢(蘇健志, 2003)。當加入有機鹼三辛基胺進行動態動力分割之轉硫酯化反應，由圖一顯示當三辛基胺加入後大幅增加了水解旁反應速率，不過其水解旁反應速率隨著醇類碳鏈數增加而降低，另外對於轉硫酯化速率則產生明顯的抑制現象，但並沒有改變碳