GII4型诺如病毒GZ121株P蛋白的表达及其结合HBGA受体特征.docVIP

  GII.4 型诺如病毒 GZ121 株 P 蛋白的表达及 其结合 HBGA 受体特征* 张绪富1，戴迎春2，吴娴波2** 5 10 15 20 25 30 35 40 45 （1. 南方医科大学中医药学院，广州 510515； 2. 南方医科大学公共卫生与热带医学学院，广州 510515） 摘要：目的：建立我国流行优势株 GII.4 型诺如病毒（GZ121）P 蛋白（包括 P 颗粒和 P 二 聚体）的原核表达系统，并明确其结合 HBGAs 受体的能力和方式。方法：从 GII.4 型诺如 病毒 GZ121 株基因组中克隆 P 区域基因片段，通过构建 P 区域氨基酸序列进化树，确定其 基因簇。构建含铰链 Hinge-P 和不含铰链 P-CDCRGDCFC 的 pGEX-4T-1 原核表达质粒，将 构 建 的 原 核 表 达 载 体 导 入 大 肠 杆 菌 （ E. coli ） BL21 ， 用 0.6mM IPTG (isoProPylthio-β-D-galaetoside)过夜诱导 P 颗粒（不含铰链）和 P 二聚体（含铰链）在 BL21 中表达。目的重组蛋白经溶血酶酶切和 FPLC 鉴定分析，用 EIA 法检测 P 颗粒和 P 二聚体 与 HBGAs 的结合特征。结果：GZ121 株诺如病毒为 GII.4 基因型 2004 簇(GII.4/2004 cluster)。 SDS电泳分析确定 P 颗粒和 P 二聚体分子量约为 36KDa，大小与报道相符。重组 P 颗粒经 FPLC 证实，其在～830KDa 质量处形成特异的 P 颗粒波峰，Western blot 技术证实了 重组 P 蛋白的特异性。EIA 分析结果表明，GZ121 株 P 蛋白与 A、B、O 型唾液均能结合， 与非分泌型唾液不结合，而 P 颗粒结合 HBGAs 受体能力是 P 二聚体的 80-100 倍，与 96 簇 VA387 P 颗粒相比，其结合 O 型能力增强，而结合 A 型能力稍弱。结论：我国优势流行株 GII.4 型诺如病毒 P 蛋白的表达成功及其与 HBGAs 受体结合模型的建立，为今后研究我国 诺如病毒的流行进化规律及疫苗的开发研究奠定了实验基础。 关键词：诺如病毒；原核表达系统；P 颗粒；P 二聚体；HBGAs 受体 Expression of norovirus GII.4 GZ121 strain P protein and analysis of its binding activity with HBGAs receptor ZHANG Xufu1, DAI Yingchun2, WU Xianbo2 (1. School of Traditional Chinese MedicineSouthern Medical University, GuangZhou 510515; 2. School of Public Health and Tropical Medicine, Southern Medical University, GuangZhou 510515) Abstract: To establish and express the P protein (P particle and P dimer) of the predominant GII-4 strain of norovirus (NoV) in China by using prokaryotic expression system and explore its binding activity and pattern with HBGAs receptor. Methods: The P domain sequence from GZ121 NoV ORF2 gene were cloned and phylogeny tree was constructed to identify the gene cluster. The pGEX-4T-1-based expression plasmids by inserting P domain with hinge and P-CDCRGDCFC without hinge were constructed and transformed into BL21. Fusion proteins were induced by using 0.6 mM IPTG overnight. And P proteins were purified after thrombin cutting and characterized by FPLC. Then the binding patterns of NoV