纳米生物催化作用及其潜在应用价值 - 生物化学与分子生物学.pptVIP

纳米生物催化作用及其潜在应用价值 方国 多学科研究中心摘要 纳米生物催化作用是将酶放入纳米结构的材料中进行的催化作用，纳米材料有纳米孔隙基质，纳米纤维，碳纳米管以及纳米颗粒。 纳米生物催化作用在调控酶的纳米微环境中表现出极高的效率 ,能应用于多个领域。 文章主要描述了纳米催化作用的研究进展和在不同领域的利用价值，比如蛋白质组学中的胰酶消化，防止生物污染，以及生物燃料电池。 背景介绍 初期纳米技术和生物技术只是简单的结合并没有产生任何增效作用。随着技术发展，这种结合导致了纳米生物催化技术的出现。 纳米生物催化的初级阶段，酶只是固定在不同种类的纳米结构材料上，它可以提高酶的加载量，从而提高酶的总活力。 传统的将酶固定在纳米材料上的方法是简单的吸附和共价连接。 纳米生物催化中酶的稳定性 酶包埋在纳米颗粒中 酶固定在纳米孔隙的基质中：ship-in-a-bottle方法 酶的团聚体包被在纳米材料上 酶包埋在纳米颗粒中(Entrapment) 油包水微乳化系统：通过聚合作用在水相和水-油界面形成分散的纳米颗粒，将酶包被其中。 难点：纳米颗粒大小的控制，每个颗粒中酶量的控制 新方法：2003年提出，“单酶纳米颗粒”(single enzyme nanoparticles (SENs)),在酶分子表面包被上几纳米厚的有机-无机混合型聚合物网络。 步骤见图。 酶固定在纳米孔隙的基质中 纳米孔隙基质： 孔径5-25nm，具有孔性可控性和很高的表面面积的特点。 传统方法：吸附作用。缺点：酶连续的析出，特别是在洗涤阶段，导致酶活力降低。 措施：共价交联，将酶分子贴附在基质的内表面。但效果不明显，因为： 1.只有孔隙的内表面而不是整个孔隙来连接酶，面积小。 2.入口处的酶分子严重阻碍了其他酶进入孔隙。 提出ship-in-a-bottle方法来改善，酶的加载量和活性提高，并且防止了酶的析出。 Ship-in-a-bottle方法 酶的团聚体包被在纳米材料上 纳米微环境与酶的稳定性 实验表明，纳米微环境对酶的稳定作用是是酶特异性的。 比如，胰酶在单壁碳纳米管表面是其构型是展开的，而大豆过氧化酶保持其构型。 纳米生物催化作用的应用 优点： 稳定酶活性，高浓度的酶加载量，酶的高活性，抗蛋白酶消化等。 应用： 蛋白质组中的胰酶消化 防止生物污染 生物燃料电池 蛋白质组学中的胰酶消化 蛋白质组学被人们关注，因为它能阐明在代谢和调控路径中起关键作用的蛋白分子，开发新型药物。在蛋白质组学实验中，胰酶消化步骤是识别样品中蛋白质成分中关键的一步。然而，现在的技术大多使用传统的孵化方法，耗时而且不可自动化。 多孔隙的硅材料已经成功的作为蛋白消化的纳米反应器。首先是将目标蛋白吸附进入多孔隙的硅材料，然后将它与胰酶溶液共培养。这种在纳米孔中的方法能提高胰酶的消化作用，具有很好的识别性，因为它含有大的蛋白质片段，也能将消化时间从12小时降低到15分钟。 胰酶消化柱，一个自动化的和高通量的装置。很多公司在尝试，但目前为止还不成功，因为柱中的胰酶缺乏稳定性而使这个装置寿命缩短。 防止生物污染 生物污染，就是蛋白质和其他分子吸附在表面上，是在医学植入体，生物感应器和感应膜存在着一个严重的问题。 一个生物友好的方法是将酶融入防污涂料。例如，蛋白酶加入到涂料来减少蛋白分子贴覆到表面。不同种类的蛋白酶已测试可作为有效的防污试剂，比如枯草杆菌蛋白酶，糜蛋白酶，链霉蛋白酶，胰酶等等。 纳米生物催化体系，如单壁碳纳米管结合蛋白酶，由于具有防污或自洁特性，能作为一种长期的防污涂层，它能阻止或减缓藻类和微生物在船体，医用植入体或生物感应器或感应膜上的贴覆。 生物燃料电池 生物燃料电池是一个非常有前景的技术，因为它使用葡萄糖，果糖，乙醇和油转化为电能。 生物燃料电池 生物燃料电池已作为低电压的感应器和通讯装置以及医学植入体的电源。但是，他们的实际应用到目前为止进展不大，因为它的使用周期短，主要是酶的稳定性低和电池的电力密度小。 可以通过不同的纳米固定方法来提高酶的加载量，这样会提高电力密度。使用电传导的材料比如碳纳米管和金纳米颗粒同样能提高电力密度，因为它能调节酶与电极间的电荷传递。 * * * 纳米孔隙的硅材料 电纺丝 磁性纳米颗粒 与传统方法相比，纳米结构材料不仅能提供大的表面积，而且能使纳米结构大小均一，比如孔径的大小，纳米纤维的直径。 传统方法在酶和包被物间不形成共价交联 SEN制备步骤： 聚合物首先在酶表面聚合，然后交联，因此在酶分子表面形成一个多聚物网络。 单酶纳米颗粒 1.纳米孔隙的基质吸附酶分子，高浓度的酶加载量。 2.戊二醛处理后酶共价交联，在纳米孔隙内形成交联