平面色谱.PPT

* 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * （四）显色： 1.日光下观察； 2.紫外灯下观察； 3.荧光薄层板检测； 4.用显色剂 斑点定位 ＊直接定位法：直接观察有色斑点的位置，或在紫外灯下观察有无紫外吸收或荧光色斑。 ＊间接定位法：喷洒显色剂进行显色反应，显色定位。 薄层分离 * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * 薄层色谱常用的通用型显色剂有： 1.碘—许多有机化合物 （使生物碱、肽类显色） 2.硫酸溶液（10%硫酸乙醇溶液）—多数有机化合物 3.荧光黄溶液—芳香族与杂环化合物； 专用型：茚三酮（氨基酸显色专用） （不同化合物的显色剂从手册中查阅） 　　　　　 直接喷雾法 　显色法 　　　　　 浸渍法 * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * 四、定性与定量分析方法 1.定性依据是：在相同的实验条件下，同种物质的Rf相同 ＊直接法：已知物对照或将定性鉴别剂滴加到斑点上反应（原位化学反应定性法） ＊间接法：提取斑点，用其它仪器分析法鉴别（UV、F、IR、MS） 2.定量分析法 ＊洗脱测定法：用溶剂将斑点洗下来，用适当方法定量分析（用显色剂定位时要显相同的对照品，以免干扰测定结果）。 ＊直接测定法：薄层扫描仪是目前最好的薄层定量分析法。 * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * 高效薄色谱法（HPTLC）： 由喷雾法制得高效薄层板（吸附剂粒度约5~10μm，分布均匀，为商品预制板），用专用点样器点样，然后展开。用薄层扫描法定量。 与经典薄层相比，其分离效率是比经典薄层提高三倍，每分钟可分离5个以上组分，分析时间短（一般小于半小时），灵敏度高。 五、高效薄层色谱法 * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * 六、薄层扫描法 （ Thin Layer Chromatography Scan TLCS ） （一）定义： 以一定波长的光照射展开后的薄层板，测定其对光的吸收或所发出的荧光，进行定量分析。 薄层吸收扫描法：用一定波长的光照射薄层板，记录吸光度A随展开距离的变化得色谱扫描曲线，曲线上每一个色谱峰是板上的一个斑点，峰高（峰面积）与组分的量在一定范围内成直线关系 薄层荧光扫描法：利用斑点组分的浓度与其荧光强度成线性关系而作为定量的依据（要求组分必须发荧光）。 * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * （二）方法： TLCS含量测定有外标法和内标法，中国药典仅采用外标法。 1.原理 外标法系将一定量的供试品溶液和对照品溶液分别点加在同一块薄层板上，展开，显色，定位，扫描被测成分和对照品斑点，测得相应的吸收度或荧光强度积分值，根据定量关系，计算出被测成分的含量。 2.类型 根据对照品标准曲线性质的不同，外标法又分为外标一点法和外标两点法。 若标准曲线通过原点，采用外标一点法。 若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。 * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * 外标一点法的直线方程： C = F A F 为斜率 外标两点法的直线方程： F2为截距 F1为斜率 * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * 1.掌握纸色谱法的分离原理； 2.熟悉纸色谱法的实验技术。 * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * 第三节 纸色谱法 一、分离原理 纸色谱法以滤纸作为载体，自然吸附在滤纸上的水份作为固定相，流动相为不与水相溶的有机溶剂。 在原理上属于分配机制，即据组分在两相中的溶解度有差异而实现分离，色谱过程在平面上完成。 Animation 动画 * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * 2.比移值：Rf 　Rf＜1，控制在0.2~0.8之间为宜，最佳范围为0.3~0.5之间。 影响比移值的因素主要有：薄层板的性质、展开剂的性质、组分的性质和温度。对同一实验体系，在定时（或定距）展开的条件下，Rf应为一定值。所以，比移值是薄层色谱最基本的定性参数。 * 新疆医科大学药学院分析/药分教研室 * 二、纸色谱法的实验技术 1.色谱滤纸的选择 Rf相差很小的组分―――慢速滤纸 Rf相差很大的组分―――快速或中速滤纸 2.点样 划起始线，点样（类似于薄层法） 3.展开 展开剂常用用水饱和过的正丁醇，常加入少量甲醇或乙醇改善展开剂的极性，也加入少量有机酸或有机碱防止弱酸或弱碱组分在展开过程中发生离解。 展开方式常