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河南省土源性线虫病监测手册 第一章 病原学监测 一、监测对象 各监测点年龄在3周岁以上的常住人口和外来人口居住满一年以上者，外出6个月以上者除外。 二、监测时间 每年9-11月份进行。 三、检查方法 1．采用改良加藤厚涂片法3～12周岁儿童加做透明胶纸肛拭法检测蛲虫卵～～ 图1. 10个视野分布 3.2.2计算出该涂片粪膜视野数，再推算出全片蛔虫卵数。 按一定的规律，如自左而右，自上而下，再自右而左，一行接一行，一个视野接一个视野地用推行器移动涂片，数出全片粪膜视野数，则：全片粪膜蛔虫卵总数＝抽查的10个视野蛔虫卵数之和×全片粪膜视野÷10 例如：抽查的10个视野蛔虫卵数相加为366，全片粪膜视野数为78，则： 全片粪膜蛔虫卵总数＝366×78÷10＝2854.8＝2855 3.3 结果登记 观察结果即时记录在原始登记表，并及时转登表1。 4．注意事项 4.1亲水性透明玻璃纸：使用前需全部浸入透明液中，浸泡24小时以上。 4.2把刮片上的细粪渣填入定量板时，必须填满中央孔全孔并抹平；压制涂片时尽量使粪便均匀展开至玻璃纸边缘，但应避免粪渣溢出； 4.3涂片放置时间长短是关键。一般室温25℃、75%湿度下，涂片放置不宜超过2小时。若温度低，空气湿度大，涂片放置时间可适当延长。总之，涂片放置时间取决于粪样透明度，只要透明了，就应及时镜检，否则透明过渡，薄壳虫卵易变形看不清楚，会造成漏检或误判。 4.4 用椭圆孔塑料定量板，每孔所容粪便重量平均41.7mg，每片所得虫卵数乘以24即得每克粪便的虫卵数，但每片虫卵数不必乘24，填在表1为实际数的虫卵数（不乘24）。 4.5 粪样一送三检，三片全计数取平均值。 （二）透明胶纸肛拭法操作步骤 1．材料 牛皮纸（或聚乙烯塑料薄膜）、市售透明粘性胶带纸（宽约2.6cm）、载玻片、小纸袋。 2．步骤 1）将牛皮纸（或聚乙烯塑料薄膜）剪成长10cm，宽8cm，在中央剪一个直径24mm圆形孔。（略大于1元钱硬币）。 2）用透明胶带纸补贴圆形孔。 3）再把载玻片盖在胶带纸上（保护胶面），装入纸袋中，纸袋外面写上受检者姓名、年龄、性别和编号。 4）检查时，取下载玻片，将有胶的一面在肛周粘压后，覆回载玻片装入纸袋，带回实验室镜检。 第二章 土壤中人蛔虫卵检查及活力测定 （一）土壤蛔虫卵的改良饱和硝酸钠漂浮检查法 1、取土样 1.1菜田 取从土表至表层以下2cm处泥土； 1.2厕所、庭院、厨房取表层土；无土层或土量不够，以鞋底刮取的土样代替； 2、土样处理 2.1 取回土样挑去菜叶、树皮等大杂物，压碎土样中的大颗粒； 2.2过筛 先后用孔径3mm的铜筛和孔径为2mm的铜筛过筛，收集过筛后的土样； 3 取2支50ml大离心管，各放入过筛后的土样10g，加5%氢氧化钠溶液至40或45ml刻度线； 4 用橡皮塞紧塞管口，用力振摇数分钟，充分混合后，2000转离心4min； 5 弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液搅拌混匀，2000转离心4min； 6 离心后，再加饱和硝酸钠溶液满至管口，覆上18mm×18mm盖玻片； 7静置15min后，取下盖玻片置于载玻片上镜检，取2管的平均值为计数结果。 （二）土壤蛔虫卵生活力测定法 1、直接镜检法 是根据蛔虫卵在发育过程中所出现的各种形态，以鉴别其死活。首先是鉴别受精卵和未受精卵，其次是鉴别有生活力和失去生活力(变性卵)的受精卵和含有幼虫卵的形态。 1.1 采用直接镜检法时，有关形态鉴别要点如下： 1.1.1未受精蛔虫卵的形态多为长椭圆形，有时呈不规则形，大小平均为80～98×40～60μm，一般为黄褐色，有时蛋白质壳发育不全，有时完全失去蛋白质壳，卵内经常充满大大小小油滴状的卵黄细胞。 1.1.2受精蛔虫卵的形态 1.1.2.1活的受精蛔虫卵的形态：蛋白质壳为黄褐色，脱去蛋白质壳的为无色透明；平均大小为50～70×40～50μm；外层卵壳厚，内层壳薄，有屈光性，最外层的蛋白质壳也很厚，呈乳状或花纹状突起；卵内有一个球形的卵细胞，卵壳两端和卵细胞之间，有半月形的空隙，卵内的卵黄颗粒清晰而致密。 1.1.2.2死受精蛔虫卵(变性卵)的形态：卵细胞移向一端，致使卵壳两端呈现有大小不等的半月形空隙。 卵内脂肪变性，形成空泡，很像未受精卵。 卵细胞颗粒减少或消失。 卵细胞质浑浊，呈黑色或棕黑色。 卵细胞向不定部位呈球状收缩。 卵壳的一侧或两侧，一端或两端向内凹陷或破裂。 只有蛋白质壳，而缺内容物。 1.1.3 含有活幼虫卵的形态： 虫体的前后部没有颗粒，中部颗粒清晰而有金属光泽，有立体感，镜检时，注视或轻压，可见有轻微蠕动，强压后，有时可挤出幼虫。 1.1.4 含有死幼虫卵的形态： 幼虫体内几乎充满颗粒，且模糊不清，无金属光