生长激素对实验性梗阻性黄疸肝细胞icam1表达的影响.pdfVIP

克。 2)实验器材：鼠固定学术台全自动生化分析仪olympus光学 虽微镜手术器械及麻醉药品 3)实验试剂：ICAM—l免疫组纯染色试荆鑫(上海中出生物 技术有限公司)瑞士雪兰诺药厂Saizen人重组生长激素。 2。实验方法 1)将45只大鼠喂养7天，道应环境并遴行检疫。 2)将45熙鼠随机分成三组A假手术组B梗黄组C生长激素 予挽组。 每缀15只进行标记加以区分。 3)每次实验各组只数一致以防缀闻差笄。 4)手术： A术前禁食12小时，自由饮水。 B2％戊范毙妥4。5毫39／loo克腹腔农注射麟黪。 C固定大鼠于手术台上，术区备皮，消毒。 D上瞧歪串留翻进黢，将肝脏向外拉开，暴露肝十二搀肠韧 带，(假手术组仅分离肝十二指肠韧带面不结扎腮管，实验组(B+ C组)30只大鼠分离出胆总管5—0丝线结扎。 E仔细缝合关腹。 5)术后24小时自由进水，进食，自由活动。 6)术后第三周始C维双后肢漆蘅皮下注隽|西GH0．75iu／ 1009，A组B组相同部位注射等量生理盐水。 7)实验三周后再次麻醉，严格无菌条件下打开腹腔，抽取门 静辣蛊燕予试管孛德测；取部分肝组织终常规磊矮甥嚣。 8)常规HE染色。 9)lcA醚一l免疫组仡染色切片自然风干衙船3％H：02作用 ·2· 1小时；链霉菌抗生素 400)4。C过夜；生物素标记的第二抗体，37。C 棕色颗粒为阳性，蒸馏水漂洗；双重染色增强剂，37。C30分钟；对 照设置：(1)两种第一抗体均不加；(2)只加一种第一抗体。 10)检测指标无着色为一，少于10％为+，10％一50％为+ +，50％为+++。 实验结果 梗黄组及生长激素干扰组的大鼠一周左右出现全身黄染，尿 色深黄；胆管结扎三周后终止实验，开腹见胆管结扎段以上极度扩 张，管壁菲薄。然后抽血测胆红素，结果符合梗阻性黄疸，模型成 功建立。 20．534-2．59 (ALT)SO组20．07±8．98IU／L，OJ组174．674-31．19IU／L，OJ+ rhGH组120．00 (DBIL)SO组4．38 0J+rhGH组129．27_-e．22．78vLmol／L。 肝脏形态学改变：大体标本见oJ组和rhGH干扰组大鼠的肝 脏肿胀、无光泽、质硬、秽暗。光镜见：梗黄组大鼠肝细胞局灶性坏 死，有炎性细胞(中性粒细胞及淋巴细胞)浸润在汇管区及间质， 有大量淋巴细胞浸润在血管周围，血管扩张充血；纤维组织带增 宽，肝脏结构改变明显。生长激素干扰组的大鼠HE染色的组织 形态学改变较梗黄组大鼠明显减轻。 大鼠肝细胞内ICAM—l表达结果：对照组阳性细胞表达少， 梗黄组表达明显增加，梗阻性黄疸组较对照组大鼠的ICAM一1表 达明显增强，P(0．Ol，统计学上有明显差异；应用生长激素后 ·3· ICAM一1表达明显减少，梗阻性黄疸生长激素干扰组与梗阻性黄 疸组两组ICAM一1表达的比较P0．05，两组数值有明显的统计 学差异。 讨 论 近年来研究发现粘附分子的表达变化与梗阻性黄疸术后感染 和多脏器损害等并发症密切相关。但是细胞粘附分子在梗阻性黄 疸时的损伤机理及如何减轻其损害，目前国内外文献鲜有报道，所 以进一步研究对临床围手术期处理有重要意义。 研究表明：白细胞(PMN)在炎症部位募集、浸润是炎症反应 的基本组织病理表现之一，也是导致疾病进展的重要因素，而白 细胞一内皮细胞(PMN—EC)粘附是其发生的分子基础，各阶段均 需多种粘附分子的参与。¨’细胞粘附分子的变化直接影响损害的 程度。细胞粘附分子是一类介导细胞问粘附的膜表面糖蛋白，在 炎症反应、免疫应答等多种生理、病理过程中发挥重要作用。目前 发现的细胞粘附分子包括五大类，即选择素家族、整合素家族、免 疫球蛋白超家族、钙粘附素及其他未分类的粘附分子，与炎症反应 关系密切的主要是前3类。免疫球蛋白超家族是一组含有多个Ig 样细胞外结构域的糖蛋白，其中参与与PMN—EC粘附的主要