磁珠法质粒DNA小量抽提试剂盒说明书.docVIP

磁珠法质粒DNA小量MagBeads Plasmid DNA Mini Extraction Kit 【】 【运输条件】225℃； 【】组分①、③、④于28℃保存其它组分室温保存； 【】 Kit Component试剂盒组成 PDE-5005 PDE-5010 （100T） PDE-5030 （300T） PDE-5100 （100T） ① PDE-Buffer 1 菌体悬浮液 12mL 22mL 65mL 220mL ② PDE-Buffer 2 菌体裂解液 12mL 22mL 65mL 220mL ③ PDE-Buffer 3 质粒复性液 20mL 40mL 110mL 400mL ④ Magnetic Beads 磁珠悬浮液 3mL 6mL 16mL 55mL ⑤ Wash Buffer 清洗液 30mL 60mL 160mL 50mL ⑥ Elute Buffer 洗脱液 mL 20mL 30mL 60mL ⑦ RNase A Solution RNase A酶溶液 30μL 60μL 165μL 600μL 【注意事项】 使用前将RNase A溶液全部加入菌体悬浮液中，4℃保存备用； 使用前检查菌体裂解液是否出现浑浊，如有请置于37℃水浴中温浴至澄清；提前置于； 裂解液和质粒复性液使用后应请立即盖紧盖子； 严禁冻融和离心，以免磁珠受到损害使用前务必充分混匀； 所有离心步骤均为室温下进行，其中加入后低温离心效果更佳； 质粒DNA抽提得量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关； 本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细阅读并按指南建议操作 【产品简介】 本试剂盒可应用于对小量菌液进行质粒DNA抽提纳米磁珠和特殊缓冲液系统。磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对质粒DNA具有极强的亲和力，当条件改变时可以可逆的释放质粒DNA，从而达到分离纯化质粒DNA的效果整个操作过程简便、快速可最大限度的去除蛋白质等杂质，保证提取所得质粒DNA的纯度所得质粒DNA产物可直接应用于酶切、测序、文库筛选、连接和转化等各种下游分子生物学实验。 试剂盒可在96孔圆孔板中实现手动法高通量操作单人同时操作96孔板，可同步实现576份样本抽提工作或者与各种自动化核酸提取仪配合使用自动化高通量操作 【试剂盒说明】 样本类型 样本量 核酸得量 单样本提取时间 6×96孔板提取时间 菌液 .0~5.0mL 10~20μg 40min 60min 【自备仪器耗材和试剂】 手动普通版金属浴涡旋混合仪磁力架手动高通量版涡旋混合仪吸水纸烘箱或电风扇水浴锅96孔圆孔板孔体积2.2mL96孔圆孔板专用磁力架96孔板离心机48孔尖底板48孔板用硅胶垫或PCR板封板膜80%乙醇。仪器自动版英芮诚ETP-00核酸提取仪涡旋混合仪96孔圆孔板80%乙醇。 【】菌体收集 将适量菌体(15.0mL)转移至EP管中12000rpm离心2min，上清液。 菌体悬浮 向EP管中加入200μL菌体悬浮液，摇晃将菌体沉淀彻底悬浮。 菌体裂解 向EP管中加入200μL菌体裂解液，上下轻柔颠倒EP管约使菌体充分裂解裂解液应变为基本澄清。 注：如果菌液量较大，可延长裂解时间至约min，但不宜超过min，质粒难以复性。质粒复性 向EP管中加入350μL质粒复性液4℃冷却充分，上下轻柔颠倒EP管使质粒复性最佳状态为内容物呈蛋花状。将EP管于4℃12000rpm离心10min，将上清液转移到新的EP管中，并做好记录。 核酸结合 向转入上清液的EP管中加入50μL吹打均匀的磁珠悬浮液涡旋振荡5min确保磁珠与溶液充分混匀。 磁性分离 将磁力架上静置20s至磁珠吸附完全如EP管内盖有磁珠残夜，保持EP管于磁力架上，整体颠倒两次使磁珠吸附，然后彻底吸弃上清液期间避免接触磁珠。 清洗 向EP管中加入500μL清洗液，从磁力架上取下，上下用力摇动35次（或使用移液器吹打）使磁珠分散均匀，然后涡旋震荡1min，参考步骤磁性分离。 使用500μL 80%乙醇，参照步骤注：该步骤DNA量过多时可能引起磁珠团聚，但不影响最终DNA得量及质量。 保持磁力架上，55℃烘箱中干燥8min。注：如没有烘箱，可将EP管置于通风橱通风或电风扇直接吹10min洗脱 取出，加入μL洗脱液，用移液器吹打或涡旋振荡3min使磁珠与洗脱液充分混匀。 注：该步骤操作完毕后，将EP管放入中继续min，再次涡旋振荡3min，可增进一步提高洗脱效率，特别是针对较大的质粒。核酸转移 将置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液器将洗脱液转移至另一干净EP管中得DNA回收产物，抽提过程完毕此时可弃去磁珠。【手动高通量版操作步骤】本试剂盒直接在48孔板中完成摇菌、收菌、重悬、裂解和复性步骤后，转入96孔板完成后续工作