1.1DNA重组技术的基本工具831.pptVIP

* 基因工程 通俗地说，就是按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作DNA重组技术或基因拼接技术。 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 获得人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基因工程 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 抗虫棉的培育有哪些关键步骤？ 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 普通棉花(无抗虫特性) 棉花细胞(含抗虫基因) 与运载体DNA拼接，导入 棉花植株(有抗虫特性) 表达 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 步骤二： 抗虫基因与运载体“缝合” 步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 步骤二： 抗虫基因与运载体“缝合” 步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 本节知识内容 1.1 DNA重组技术的基本工具 专题一　基因工程 “分子手术刀” ──限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车”──基因进入受体细胞的载体 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是原核生物 4000种 1、来源： 2、种类： 3、作用： 5、结果： 形成两种末端 一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 4、切割方式： 错切和平切 A T G C A T G C 限制酶切割磷酸二酯键 （1）大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端。 （2）SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端 。 6、常见的两种限制酶 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被切开的DNA两条单链的切口带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaⅠ 平末端　　　平末端 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 DNA连接酶的作用过程 二、分子缝合针——DNA连接酶（P5） A C A T T G C G 连接酶连接磷酸二酯键 １、作用部位： 是磷酸二酯键（扶手） 不是氢键（梯子） DNA连接酶将两条DNA链连接起来的酶。 连接黏性末端 连接黏性末端和平末端 分类 作用 E.coli 　DNA连接酶 2、连接酶种类： T4　DNA连接酶 3、比较：DNA连接酶与DNA聚合酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 连接部位 双链 将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 单链 将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 三、分子运输车——基因进入受体细胞的载体 1、外源DNA片段怎样才能插入载体呢？ 2、插入载体的DNA片段怎样才能确保自己在受体细胞分裂时不被丢失从而稳定地存在于子细胞内？ 3、目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 4、如果载体对受体细胞有害将怎样？ 具备哪些条件才能充当“分子运输车”？（P6） 1、载体必须具备的条件： （1）具有多个限制酶切点，以便与外源基因插 入其中； （2）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； （3）具有特殊的遗传标记基因，便于进行筛选； （4）对受体细胞无害； （5）DNA大小应合适。 能复制并带着插入的目的基因一起复制 标记基因将来可用含青霉素的培养基鉴别。 有切割位点 　　质粒是一种裸露的、结构简单、独立于染色体或细菌拟核之外，能自我复制的小型环状双链DNA分子。 2、认识常用的载体——质粒 要对天然质粒进行人工改造。 常用的载体还有：