产枯草芽孢杆菌实训报告.pptVIP

生化工艺实训报告 一 产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的优化 1、产淀粉酶枯草芽孢杆菌斜面活化 2、摇瓶发酵优化培养基及种子培养 3、葡萄糖标准曲线的制备 4、发酵参数的测定 1、产淀粉酶芽孢杆菌斜面活化 实验材料 菌种：从土壤中分离产淀粉酶的枯草芽孢杆菌 配方：牛肉膏蛋白胨培养基 蒸馏水400ml、牛肉膏2g、蛋白胨4g、氯化钠2g、琼脂0.2g、PH7.0~7.2 试剂：牛肉膏、氯化钠、氢氧化钠溶液、蛋白胨、琼脂、盐酸溶液 实验内容 1、制备培养基：依照培养基组成稀释后定容400ml，分装与6个摇瓶中，50ml。剩余溶液分装与6个试管中，均10ml，并加0.2g琼脂。 2、灭菌：高压灭菌锅 121摄氏度 0.11MPa 20~30min 3、斜面摆放：灭菌后的试管静止冷却至50摄氏度左右，将试管的液面及搁置的试管斜面长度不超过试管总长一半，凝固后待用。 4、斜面活化：在超净工作台中将保藏的芽孢杆菌接种置已制好的斜面上划线。 5、恒温培养：恒温培养箱 37摄氏度 过夜培养进行活化 2、摇瓶发酵优化培养基 实验材料 试剂：牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 淀粉 葡萄糖 仪器设备：分光光度仪、超净工作台、烧杯、摇瓶、电炉、斜面活化的菌种、牛肉膏蛋白胨液体培养基、玻璃棒等玻璃仪器 实验步骤： 摇瓶发酵培养基优化 实验步骤 依照优化培养基配方制备相应试剂，每个配方平行试验两次 灭菌：将12个摇瓶与高压蒸汽灭菌锅内进行灭菌 121摄氏度 0.11MPa 15~20min 种子培养 接种：选取生长状况良好的试管斜面进行接种，挑取活化菌接种到液体培养基中，平行6个 培养条件：37摄氏度 摇床培养 注意事项： 确保在灭菌环境中进行 对培养基进行标注，以免混淆 3、葡萄糖标准曲线的制备 试验步骤 1）DNS试剂的制备：称取3.25gDNS溶与热蒸馏水中，加入2mol/L氢氧化钠溶液162.5ml，再加入22.5ml丙三醇，摇匀，冷却后定容500ml，待用。 2）葡萄糖标准试剂待用中 3）在下述试管中分别加入DNS 试剂2ml于沸水浴中加热2min进行显色，取出后立即冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在分光光度计中540nm波长处测定光吸收值。 4）以葡萄糖含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线 3、发酵参数的测定 实验步骤 在超净工作台上将方案1、2、3、4、5均按2%接种量进行接种，在180r/min的摇床进行培养；方案6接种4%在120r/min的摇床上进行培养。每隔一小时进行取样（包含0小时），检测酶活、菌浓、及其PH值。 根据各数据挑选最优培养方案。 生长曲线绘制 将取样稀释后与分光光度计（波长600nm）测OD值，空白为蒸馏水。 绘制生长曲线，横坐标为培养时间，纵坐标为菌浓。 酶活测定 发酵液离心处理 8000rpm 5min 1ml离心后的上悬液加入5ml1%淀粉溶液与37摄氏度水浴5min，然后沸水浴5min，终止反应。 取上述溶液1ml加入DNS试剂2ml与沸水浴加热，2min进行显色反应，取出后迅速冷却，各加入9ml蒸馏水，摇匀，在540nm波长处测光吸收值。以发酵液加1%淀粉溶液直接加热，煮沸后再加2mlDNS试剂，作为空白。 实验总结分析 根据生长曲线图及酶活曲线，可得方案5的培养基为最优培养基。 根据本组试验结果分析淀粉量的增加未使菌体的生长量及酶活有一定量的增加，分析有可能是试验过程中操作不当，或染菌。 二 青霉素发酵生产仿真操作 操作步骤 空罐灭菌 实罐灭菌 正常发酵 重要参数： 补糖 初始参数20 硫氨 初始参数12 前体15 氨水10 消泡剂 初始80 排气37 空气进气55 青霉素仿真总结及分析 仿真操作加强了同学们的动手能力及对实操的认识及掌握。 在不断的练习中，逐步熟练并对参数数据有了更加清楚的掌握和控制。 对同学们的实操奠定了基础。 枯草芽孢杆菌发酵的实罐操作 二 枯草芽孢杆菌的实罐操作 实验材料及仪器设备 实训意义 生化工艺实训是为了让学生掌握一定的生物化工工艺单元操作基本技能的基础上进行的一次综合性实践训练。主要对有机品发酵过程中常见的单元操作过程及设备进行的基本操作技能训练。 防止染菌的要点 染菌是抗生素发酵的大敌，不制服染菌就不能实现优质高产。影响染菌的因素很多，而且带随机性质，但只要认真对待，过细地工作，染菌是可以防止的。请到左边的导航栏里选择查看防止染菌的要点的内容。 空气系统的要求 防止空气带菌主要是提高空压机进口空气的洁净度，防止空气夹带油和水及空气过滤器失效。 提高空压机进口空气的洁净度，可以从提高吸气口的位置及加强空气的压缩前过滤着手。防止空气夹带油、水，除加强去除油、水的措施外，还必须防止空气