注射用青霉素钠的细菌内毒素检查王丽娟.PPTVIP

注射用青霉素钠的细菌内毒素检查 药品质量检测技术国培项目 主讲教师：王丽娟 试验原理 利用鲎试剂与微量内毒素产生凝集反应的现象，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 试验流程图 鲎试剂 限值确定 最大有效稀释倍数确定 干扰实验 供试品细菌内毒素检查 结果判断 灵敏度复核 供试品 试验器具的准备 试验试剂与器具 鲎试剂（λ=0.125EU/ml） 细菌内毒素工作标准品 （CRE，10EU） 细菌内毒素检查用水（BET） 注射用青霉素钠（80万单位） 恒温水浴器（37℃±1℃） 无热原移液管、试管 注射器 安瓿架（自制） 封口膜 标签纸和记号笔 剪刀 表 试验方法 凝胶限度试验（简单、经济、应用广泛，《中国药典》的“仲裁”方法） 内毒素限值确定 根据2010版《中国药典》二部“注射用青霉素钠”检查项下“细菌内毒素”的规定，其限值（L）为每1000U应小于0.1EU 。 最大稀释倍数确定 已知：L为0.1EU/1000U，鲎试 剂灵敏度λ=0.125EU/ml。 解： MVD＝cL/λ，则c=λ×MVD/L，因为供试品为注射用无菌粉末，因此MVD取1，故：c=λ/L，c为最小稀释浓度。 c=λ/L =0.125/0.0001=1250U·ml-1。 注射用青霉素钠的稀释过程为： 取注射用青霉素钠 1支，加细菌内毒素检查用水1.0ml充分溶解，取上述溶液0.2ml，加细菌内毒素检查用水1.8ml混匀，取混合液0.2ml，加细菌内毒素检查用水1.4ml，摇匀，再取该混合液0.4ml，加细菌内毒素检查用水1.2ml，再取该混合液1.0ml，加细菌内毒素检查用水1.0ml，即得1250 U·ml-1的供试品溶液。 0.2ml 1.8mlW 0.2ml 1.4mlW 0.4ml 1.2mlW 1.0ml 1.0mlW 供试品细菌内毒素的检查 按下表制备溶液A、B、C和D。 编号 内毒素浓度/配制内毒素的溶液 平行管数 A 无/供试品溶液 2 供试品溶液 B 2λ/供试品溶液 2 供试品阳性对照 C 2λ/检查用水 2 阳性对照 D 无/检查用水 2 阴性对照 （1）供试品溶液（A）的配制 用BET水将供试品稀释成相应浓度（1250U·ml-1）的溶液。 （2）阳性对照液（C）的配制 用BET水将CRE制成 2λ浓度的内毒素溶液。 0.2ml 1.8mlW 1.0ml 1.0mlW 1.0ml 1.0mlW （3）供试品阳性对照液（B）的制备 供试品（S）的稀释 CRE的稀释 供试品阳性对照液（B） 1.0ml 1.0mlS4 0.2ml 1.8mlW 1.0ml 1.0mlW 1.0ml 1.0mlW 0.2ml 1.8mlW 0.2ml 1.4mlW 0.4ml 1.2mlW 1.0ml 1.0mlW 取8只鲎试剂，分别加0.1mLBET复溶，在分别加入A、B、C、D组溶液各0.1mL （每组2管） 。加样结束后，用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，放入37℃±1℃恒温器中，保温60±2分钟，观察并记录结果。 结果判断 当阳性对照和供试品阳性对照都为阳性，且阴性对照都为阴性时，试验方有效。 若供试品2管均为阴性，认为该供试品符合规定；如供试品2管均为均为阳性，应认为不符合规定；如2管中1管阳性，1管阴性，则另取4支供试品管复试，4管中如有1管为阳性，即认为不符合规定。 视频 鲎试剂灵敏度的复核 干扰试验