淋巴细胞分离液 - biosharp.PDFVIP

淋巴细胞分离液 产品编号 产品名称 规格 BL590 淋巴细胞分离液 200mL 英文名称：Lymphocyte Separation Medium 适用范围： 通过密度分离作用，用于样本中淋巴细胞的分离，以便于对淋巴细胞的进一步分析。 主要组成成分： 泛影酸钠、聚蔗糖、羟乙基淀粉、注射用水等。 适用仪器：离心机。 应用原理： 密度梯度沉降法是根据细胞密度差异，借助细胞分离液和离心，进行细胞分离纯化的常 用方法之一。淋巴细胞分离液产生一定程度的密度梯度，将稀释后的全血铺层于分离液之上。 离心后，红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于 分层液比重漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的 细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。 本产品将羟乙基淀粉和泛影酸钠按照一定比例混合，调整密度、渗透压、pH 值，制成 一种密度在 1.077g/mL 并且与外周全血等渗的溶液 （分离液），经过密度梯度离心，使一 定密度的细胞按照相应密度梯度分布，从而分离出淋巴细胞。 检验方法： 1、取新鲜抗凝全血，用等体积PBS或0.9%NaCl稀释全血。 2、在离心管中加入与抗凝未经稀释全血等体积的分离液，将稀释后的血样平铺到分离 液液面上方，保持两液面界面清晰。分离液、抗凝未经稀释全血、PBS （或生理盐水）体积 为 1:1:1。 3、室温，水平转子 650-700g （2000-2500rpm）离心 15-20min。 4、离心结束后，管底是红细胞，中间层是分离液，最上层是血浆/组织匀浆层，血浆层 与分离液层之间是一层薄较致密的白膜，即：单个核细胞 （包括淋巴细胞和单核细胞）层。 5、小心吸取白膜层到另一离心管中。 6、用PBS 或RPMI1640 稀释到一定体积，颠倒混匀。室温，水平转子 650-700 g （2000-2500rpm）离心5min，弃上清。 7、重复洗涤1-2 次。 8、用PBS或合适的培养基将淋巴细胞重悬备用。 阳性判断值或者参考区间：无。 样本要求： 本分离液要求样本为新鲜的抗凝血，血液收集时应无菌操作且储存、处理和运输过程中 避免冷冻和冷藏。 检验结果的解释： 由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效 果，用户可以调节离心转数和离心的时间，摸索最佳的分离条件 （具体分离条件各实验室自 定）。 检验方法的局限性： 本实验要求，样本、分离液及分离环境温度为(20± 5) ℃。 产品性能指标： 密度 1.077± 0.001g/mL PH 6.0-7.0 性能 收集淋巴细胞的纯度大于80% 注意事项： 1、启封后应置 4 ℃保存，避免微生物的污染。 2、细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，需待溶液温度升至室温时，摇匀后使用。 3、整个分离过程中，温度应控制在 （20± 5）℃。 4、为保持淋巴细胞的活性，应该采血后尽快进行分离。分离细胞层实际上是单个核细 胞层，包括淋巴细胞和单核细胞。 5、分离时请严格按照比例，每一份淋巴细胞分离液加两份稀释后的血液。 保存条件： 常温避光保存，有效期为2年；开包装后4 ℃存放保质1周。