德昌水牛Bola—DRB3基因第二外显子的PCR—RFLP多态性研究.pdfVIP

第28卷第 6期 家畜生态学报 Vo1．28 NO．6 2007年 l1月 Acta Ecologiae Animalis Domastici NOV．2007 德昌水牛Bola—DRB3基因第二外显子的 PCR—RFLP多态性研究 陈智华，顾 磊，钟金城 (西南民族大学生命科学与技术学院，四川 成都 610041) [摘 要] 本研究应用PCR—RFLP方法，对德昌水牛MHCⅡ类基因座位的Bola—DRB。基 因第2外显子进行了遗传多态性研究。结果表明：HaelII酶切出现7种基因型，即AA、AB、 AD、BC、AC、BF和BB，共有A、B、C、D、F 5个复等位基因控制；AA型的频率最高，为优势基 因型，A基因为优势基因。RsaI酶切结果出现3种基因型，即GH、GG、HH，共有G、H 2个基 因控制；GG的频率最高，为优势基因型，G基因为优势基因。这表明德昌水牛在Bola—DRB 基因第2外显子上具有丰富的多态性。在 RsaI酶切位点上，德昌水牛未达到 Hardy— Weiberg平衡状态，显示在群体中有选择、基因突变、近交、遗传漂变等因素的一定影响，这是 对保种极为不利的，应引起畜牧工作者的关注。在德昌水牛遗传资源的开发利用和保存中，作 者认为应严格划定杂交改良和保种区的范围；在杂交改良区内可以进行选育、品种间杂交，充 分利用杂种优势，提高其生产性能；而在保种区或群中不进行杂交，同时减少选育；使德昌水牛 遗传资源的有效保存和充分利用有机的结合起来。 [关键词] 德昌水牛；Bola—DRB3基因；PCR—RFLP；遗传多态性 [中图分类号] $811．5 [文献标识码] A [文章编号] 1004—5228(2007)06—0049—05 德昌水牛体格较大，体质结实，生长发育快，适 28头健康成年的德昌水，颈静脉采血，冰盒内带回 应性广，役力强。属于沼泽型水牛，是中国水牛中的 实验室，根据 Debomoy(1991)和 Sambrook(1989) 一 个优良品种。主要分布于四川I省凉山彝族自治州 的方法提取基因组DNA[3 ，置于一20℃保存备用。 安宁河流域的德昌、西昌、冕宁、会理及米易等县市， 1．2 引物的设计和合成 分布区海拔 480～2520米 ]。Bola是牛的多态性 参照Lewin(1992)公布的瑞典红白花牛DRB3 最丰富的基因系统之一，用他检测遗传多态性是十 基因的引物序列[4]以及 NCBI上的序列(GenBank 分适合的。目前利用PCR—RFLP技术，在 DRB3 accession NO．：AF0373l5和U64464)，用引物设计 基因位点上均检测出了几十种不同的等位基因。但 软件Primer5．0和 Oligo6．0综合分析设计一对引 有关德昌水牛Bola基因的研究，国内外尚未见报 物，其中上游引物(PF)：5 一ATC CTC TCT CTG 道L2]。本研究对德昌水牛 Bola—DRB3基因的 CAG CAC ATT TCC一3 ，下游引物(PR)：5 一 RFLP多态性进行了分析，以期为探讨德昌水牛的 TTT AAA TTC GCG CTC ACC TCG CCG CT一 遗传多样性和保种利用，以及起源、演化和分类研究 3 ，预期片段长度为284bp左右。由大连宝(Taka— 提供理论依据。 Ra)生物工程有限公司合成。 1．3 PCR扩增 1 材料与方法