类缺血再灌注小鼠皮质神经元DNA单链损伤与Bax表达的关系论文.docVIP

　　类缺血再灌注小鼠皮质神经元DNA单链损伤与Bax表达的关系论文 俞英欣，万琪，张瑞国，孙文萍 【关键词】 脑缺血 【Abstract】 AIM: To study DNA singlestrand damage at different time points and expression of Bax in cortical neurons under ischemiclike conditions and to investigate the relationship of the expression of Bax and DNA singlestrand damage. METHODS: The expression of Bax eter in cortical neurons under ischemiclike conditions. The treated neurons ethod at different time point of reperfusion for the positive expression and a half quantitative analysis ade. RESULTS: 2 hours after reperfusion, the expression of Bax reached peak point and the positive neurons of Bax decreased e. The average gray of Klenoe. The highest average gray iclike conditions, the expression of Bax reaches peak point 2 hours after reperfusion and so is the DNA singlestrand damage, suggesting that the expression of Bax may be related to the DNA singlestrand damage. 【Keyia; reperfusion; DNA singlestrand damage; Bax; Klenoethod 【摘要】 目的： 研究神经元类缺血再灌注不同时间点DNA单链损伤和Bax的表达情况, 探讨神经元类缺血再灌注时DNA单链损伤与Bax表达的关系. 方法： 利用流式细胞仪对小鼠皮质神经元类缺血再灌注损伤后Bax的表达进行检测. 应用Klenopus)，流式细胞仪(美国Coulter公司). 1.2方法 1.2.1细胞培养孕15 d昆明种二级孕鼠,引臼脱颈处死,剖开腹部，取出胎鼠,分离胎鼠大脑脑泡外侧部的皮质,剪碎脑组织,胰酶消化,终止,以完全培养基稀释至7×108个 L-1，台盼蓝染色评估细胞活性，95%左右为存活细胞. 接种于经多聚赖氨酸处理过的加有玻片的培养皿和培养瓶中,.freelL L-1 CO2 的培养箱, 37℃,培养48 h后,加入阿糖胞苷(10 mg L-1)以抑制非神经元的继续生长,每隔2 d半量换液,培养7 d后,可见典型的神经元. 1.2.2神经元鉴定培养第7日的神经元细胞爬片，40 g L-1多聚甲醛固定，PBS洗后，加入βTubulin抗体和Gap43抗体染色. 二抗为FITC标记的，缓冲甘油封片，荧光显微镜观察计数，每种抗体计数3张爬片. 1.2.3类缺血模型建立细胞培养基换为不含糖的人工脑脊液，温度保持在(37±2)℃，混合气体换为 含80 mL L-1 CO2 的氮气［6］. 人工脑脊液配制其组成为(mmol L-1)：NaCl 123, KCl 3.75, KH2PO4 1.25 ,NaHCO3 26, MgCl2 1, CaCl2 2, pH 7.4. 1.2.4实验分组将培养好的细胞随机分为缺血组和对照组：① 缺血组,按类缺血模型处理30 min. 然后再换为完全培养基送入50 mL L-1 CO2 的培养箱, 37℃， 30 min， 1, 2, 3, 6, 12和24 h取出； ② 对照组,未经缺血处理的细胞. 上述实验及对照组均随机选取3个细胞爬片. 1.2.5DNA聚合酶ⅠKlenoL L-1 H2O2处理后，用lX Klenoin-1离心1 min，收集的细胞加入50 mg L-1 Saponin (Sigma公司)打孔，应用FCM洗液洗后，加入Bax抗体1 h, 37℃，经FCM洗液洗后，离心，加入FITC标记二抗，经FCM洗液洗后，上机检测，每组选择3个. 统计学处理：实验结果以 x±s表示. Klenoethod of con