细胞因子体外诱导慢性髓细胞性白血病树突状细胞分化的研究论文.docVIP

　　细胞因子体外诱导慢性髓细胞性白血病树突状细胞分化的研究论文 .freel Chronic Myeloid Leukemia 0. Abstract The purpose of this study echanism of effects of interferon-alpha (IFN-α) on chronic myeloid leukemia (CML). Bone marroononuclear cells（BMMNC） heparinized blood of CML patients by Ficoll-Paque density gradient centrifugation. The expressions of CD1a，CD83，CD86，HLA-ABC，HLA-DR and CD54 on DC induced by IFN-α+GM-CSF，IFN-α+GM-CSF+IL-4 and IL-4+GM-CSF for 7 days in vitro etry. The morphologic features ission and optical microscopy. The mixed lymphocyte reactions (MLR) onths of IFN-α treatment (P 0.05) . The DC from the IFN resistant group did not express significantly CD86 and MLR in IFN-α+GM-CSF+IL-4 groups pared to those in the ne CML cultured in bination orphologic and immunophenotypic characteristics. Addition of IFN-α+GM-CSF+IL-4 to DC cultures can significantly up-regulate the expression of major histopatibility plex molecules，co-stimulatory molecules and various adhesion molecules. The deficiency of DC differentiation and function may play a role in the development of clinical resistance to IFN-α. Key yeloid leukemia；IFN-α；dendritic cell；cytokine 树突状细胞（dendritic cell，DC）是激活初始型T细胞和维持细胞免疫反应最重要的抗原呈递细胞（antigen-presenting cell，APC），其功能是通过表达大量的I、II类人白细胞分化抗原(human leukocyte antigen，HLA-I、II)分子、共刺激分子及黏附分子而实现的。干扰素（interferon-α，IFN-α）是目前治疗慢性粒细胞性白血病（chronic myeloid leukemia，CML）的首选药物，能部分消除Ph1染色体阳性细胞，推迟急变的发生［1，2］，但机理尚未完全明了。我们试图从IFN-α 诱导CML特异性DC产生的角度解释其治疗CML的机理，为临床治疗CML提供新的思路。 材料和方法 研究对象及分组 选取我院经骨髓及染色体检查确诊为CML的患者20例，分为A、B、C 3组，其中A组9例，为新诊断而未治疗的患者（Ph1染色体阳性率为100%）；B组6例，为干扰素治疗6个月后达到部分细胞遗传学缓解患者（Ph1染色体阳性率小于95%）；C组5例，为干扰素治疗6个月后无细胞遗传学缓解的患者（Ph1染色体阳性率大于95%）。 DC的体外定向诱导分化及形态观察 采集患者骨髓液3 ml（已治疗者于停药半月后采集），肝素（40 U /ml）抗凝，用37℃的PBS液2倍稀释。取20 ml玻璃离心管，加淋巴细胞分离液后将上述已稀释的抗凝骨髓液沿管壁轻轻加在淋巴细胞分离液面上，使体积比为3∶2，1500rpm离心20分钟，由上至下可分4层：血清、单个核细胞（BMMNC）、淋巴细胞分离液、红细胞。收集BMMNC置于10 ml离心管中，用PBS稀释，分别以1500、1000、800 rpm各离心10分钟，3次，洗净血小板后记数。参照Romani 等［3］分离培养DC的方法，以无血清RPMI 1640培养液悬浮沉淀细胞，调整细胞浓度到（3-5）×106/ml 后接种于培养瓶中，在37℃、5% CO2孵箱中温育2小时；轻轻吸出未贴壁细胞