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　　经鼻黏膜给予MBP68论文 .freelental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in Leinistration. METHODS: Three different MBP peptides(MBP6886, 8799, and the nonencephalitogenic peptide 110128) inistrated nasally to Lemunization EAE by the MBP peptides ore potent, but not inistration of a mixture of MBP6886 and 8799 pletely blocked gpMBPinduced EAE even at lophocyte proliferation and IFNγ ELISPOT assays. Rats tolerized RNA expression in lymph node cells pared to rats receiving MBP110128 nasally, ilar loRNA expressing cells inistration of encephalitogenic MBP peptides can induce antigenspecific T cell tolerance and confer inplete protection to gpMBPinduced EAE, and MBP 6886 and 8799 have synergistic effecs. Nonregulatory mechanisms are proposed to be responsible for tolerance development after nasal peptide administration. KeyRNA的细胞数减少, 而两组表达TGFβ及IL4 mRNA的淋巴细胞数都低。结论: 鼻黏膜给予致脑炎性MBP多肽能够导致抗原特异性T细胞耐受, 对gpMBP引发的EAE提供不完全的保护, MBP6886和MBP8799具有协同作用。鼻黏膜给予多肽引发的免疫耐受与非调节机制有关。 关键词鼻黏膜耐受; MBP6886; MBP8799; 实验性自身免疫性脑脊髓炎 实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）是一种可致中枢神经系统瘫痪的自身免疫性疾病, 为人类多发性硬化（multiple sclerosis, MS）的实验动物模型。引发EAE动物模型的方法有多种。最常见的是用豚鼠髓鞘碱性蛋白（guinea pig myelin basic protein, gpMBP）和弗氏完全佐剂的混合液免疫Lea公司。U型底96孔培养板购自Nunc公司。methyl3H胸腺嘧啶购自Amersham公司。玻璃纤维滤纸购自Titertek公司。IFNγ、 TNFα、 IL4和TGFβ基因的杂交探针由上海Invitrogen生物公司合成。 1.2 方法 1.2.1 诱导鼻黏膜耐受 将MBP6886、 8799、 110128及MBP6886+8799多肽混合物等质量混合分别作为耐受原。所有耐受原临用前用0.05 mol/L pH7.4的PBS溶解。大鼠经乙醚轻微麻醉后用微量吸管给药, 每只大鼠每次给药的总体积为60 μL。每种耐受原鼻黏膜给予的药物剂量和时间, 均分别在图表和图注中说明。 1.2.2 EAE动物模型的建立 Leg结核菌素、 100 μL IFA和100 μL PBS溶液）, 建立EAE模型。评分标准如下: 无症状者为0分; 尾无力者为1分; 无正向反射、 伴或不伴有部分后肢瘫痪者为2分; 后肢完全瘫痪者为3分; 濒死者为4分; 死亡者为5分。 1.2.3 引流淋巴结单核细胞（MNC）的制备 免疫后12 d处死大鼠, 取出窝和腹股沟淋巴结（PILN）, 制备单核细胞悬液, 并调整细胞的密度为2×109/L。 1.2.4 淋巴细胞增殖实验 于U型底96孔板中, 每孔加入2×109/L PILN 的MNC 200 μL, 设3个平行孔, 分别加入10 μL MBP或MBP多肽（终浓度为20 mg/L）或ConA（终浓度为5 mg/L）, 于37℃、 50 mL/L CO2孵育60 h。加入3H胸腺嘧啶（终浓度为1 μCi/孔）于37℃、 50 mL/LCO2孵育12 h, 以玻璃纤维滤纸收集细胞, 用β射线计数器测定cpm值。 1.2.5 抗原反应性IFNγ分泌细胞的ELISPOT检测 用小鼠抗大鼠IFNγ 单克隆抗体（mAb）包被硝