结核分枝杆菌基因分型及其耐药性分析论文.docVIP

　　结核分枝杆菌基因分型及其耐药性分析论文 【摘要】 探讨四川地区结核患者结核分枝杆菌基因分型及其与耐药性关系。方法 采用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术,对124株结核分枝杆菌的6个可变重复位点进行检测,并应用Gel-Pro analyzer 3.0软件和BioNumerics(Version 3.0)软件对检测结果进行基因型分析,同时分析其基因型与耐药之间的关系。结果 124株结核分枝杆菌共分为37个不同的VNTR类型,成簇基因型占74.19%（92/124），单一基因型占25.81%（32/124）。耐药菌株在成簇类型和单一类型的分布上存在统计学差异。结论 四川地区结核患者的结核分枝杆菌具有明显的基因多态性，成簇类型是主要流行菌株，应加强流行结核菌株的监控。 【关键词】 结核 结核分枝杆菌 基因分型 Abstract：Objective To study on genotyping of Mycobacterium tuberculosis(MTB) isolates and to analysis the relation betber tandem repeat(VNTR)in Sichuan area.Methods Six tandem repeat loci of the 124 isolates of M.tuberculosis in Sichuan area erics 3.0 softorphism in the M.tuberculosis isolates in Sichuan area.And the clustering type ain epidemic strains.It is suggested that surveillance of the epidemic genotype to be strengthened. Key tuberculosis;genotyping 结核病仍然是一种严重危害人类健康的重大传染性疾病，特别是耐药结核分枝杆菌的发生和流行，给结核病的治疗、预防和控制带来巨大困难。目前，随着分子生物学的发展，可变数目串联重复(variable number tandem repeat .freelin，快速离心,取上清备用。 1.5 重复位点的选择 参照文献国内外报道［1～5］,依据其多态性分析结果,确定了6个串联重复基因位点,其中包括3个ETR(exact tandem repeat)位点和3个MPTR(major polymorphic tandem repeat)位点(见表2-2)。实验中以标准测序株H37Rv为对照并以其实验结果获得相对分子质量大小。 1.6 VNTR-PCR 采用25ulPCR反应体系。PCR产物经2%的琼脂糖凝胶恒电压(10 v/cm)电泳,.freell)分别为0.2,40.0,2.0,10.0.耐药标准:含药培养基菌落数/对照培养基菌落数≥1%为耐药。 1.8 结果判定 以参照菌株H37RV拷贝数为参考，根据待测样品６个位点的PCR 扩增产物的大小(bp数)确定每个位点相应串联重复单元的重复次数,然后计算每个菌株相应位点的重复次数,即VNTR等位基因类型。根据VNTR方法获得的基因型确定分离株是成簇还是单一类型。基因型相同的分离株为成簇,而基因型与本研究中的其他任何分离株均不匹配则为单一基因型。 1.9 统计软件 BioNumerics (Version3.0)统计分析软件；SPSS（12.0）统计软件包。 2 结果 2.1 124株临床分离株的菌种鉴定结果 采用鉴别培养基PNB和TCH对124株临床分离菌进行鉴定，根据菌株在培养基上生长情况来鉴别结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非结核性分枝杆菌，结果显示124株临床分离株均为结核分枝杆菌。 2.2 124株结核分枝杆菌的药敏结果 研究菌株通过培养基培养结果显示：完全敏感菌株（对利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇均敏感）有92株，占74.19%（92/124），耐药菌株32株，占25.81%(32/124)。 2.3 124株结核分枝杆菌VNTR结果 根据国外研究结果，本研究选取了8个基因位点，并对124株结核分枝杆菌进行VNTR检测，以H37RV标准株作为对照，选取100bp DNA Marker作为分子量参照，其分子量从小到达依次为：100bp、200bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、800bp、900bp、1 000bp和1 500bp共11个分子量标准带。结果显示不同菌株的VNTR DNA指纹图谱在同一位点的扩增片段大小不同，不同菌株在不同位点的DNA指纹图谱也呈现出多态性，见图1～6. 2.4 不同菌株的VNTR位点的