实验(五六七).doc

实验一 普通光学显微镜的使用及其对微生物一般形态的观察 一、实验目的 1．了解普通光学显微镜的构造及其各部分的作用。 2．掌握普通光学显微镜的正确使用和维护方法。 3．通过低倍镜、高倍镜观察藻类，酵母菌的一般形态。 二、实验原理 普通光学显微镜由机械部分和光学部分组成。 图1-1 双目生物显微镜 1．机械部分： （1）镜筒：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。镜筒的上端可插入目镜，下面与转换器相连。 （2）转换器：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。有3~4个孔，用于安装不同放大倍数的物镜。 （3）载物台：载物台是放置标本的方块平台，中央有透光孔，载物台上面有玻片夹持器，侧面有移动手轮，可纵向和横向移动标本。 （4）调焦手轮：包括粗调手轮和微调手轮，可使载物台上下升降，调节物镜和标本之间的距离。 2．光学部分： （1）目镜：放在镜筒上，配有10倍（10×）、16倍（16×）两种。 （2）物镜：装在转换器的孔上，有低倍镜（4、10）、高倍镜（40）和油镜（100），是显微镜中最主要的部分。各种镜头上都刻有放大倍数和数值孔径（）及所要求盖玻片厚度等主要参数。物镜的性能由数值孔径决定，并且还依赖于物镜的分辨率。 （3）聚光器：由聚光镜和孔径光阑组成。聚光镜的作用是把光线聚集在标本上，增强照明度。孔径光阑是用来对比度 项 目 放大倍数 低倍镜观察 高倍镜观察 五、思考题 1．镜检标本时，为什么要先用低倍物镜观察？ 2．画一个细胞结构的示意图。 实验二（1） 培养基的制备及灭菌 一、实验目的 1．熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。 2．掌握培养基的制备方法。 3．掌握高压蒸汽灭菌技术。 二、实验原理 培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。把一定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。但是，不同种类和不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。此外，培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。 根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基和固体培养基。根据培养基使用目的，可将培养基分为选择培养基、加富培养基及鉴别培养基等。 固体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。琼脂在95℃的热水中才开始融化，融化后的琼脂冷却到45℃才重新凝固。因此用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内(25℃-37℃)不会融化而保持固体状态。 灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物。消毒是用物理或化学的方法杀死物体上绝大部分微生物(主要是病原微生物和有害微生物)。消毒实际上是部分灭菌。 在微生物实验、生产和科研工作中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌，因此，对所用器材、培养基要进行严格灭菌，对工作场所进行消毒，以保证工作顺利进行。 三、实验器材 1．培养皿（Ф90mm）×150mm）5支，（18×180mm）2支，试管架 3．吸量管（10mL）2支，（1mL）8支 4．锥形瓶（250mL）3个 5．烧杯（500mL）1个，50mL1个 6．吸耳球，玻璃棒，滴管 7．纱布、脱脂棉、报纸、精密pH试纸 8．漏斗、漏斗架 9．10% NaOH溶液、10% HCl溶液 10．牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水 11．高压蒸气灭菌器 12．电热恒温培养箱 13．天平、电炉、镊子、牛角勺 四、实验方法 1．玻璃器皿的洗涤和包装 （1）洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。培养皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自来水冲净。移液管先用洗液浸泡，再用自来水冲洗干净。洗刷干净的玻璃器皿自然晾干或放入干燥箱中烘干，备用。 （2）包装 ①培养皿由一底一盖组成一套，用包装纸将5套培养皿包好。 ②移液管的吸端用细铁丝将少许棉花塞入构成1~1.5cm长的棉塞，将塞好棉花的移液管的尖端，放在4~5cm宽的长纸条的一端，移液管与纸条约成30o夹角，折叠包装纸包住移液管的尖端，左手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，纸条螺旋式包在移液管外面，余下的纸头折叠打结。按实验需要，可单只包装或多只包装，待灭菌。 ③用棉塞将试