动物细胞大规模培养 ppt.ppt

大规模动物细胞培养体系 Large-scale animal cell cultivation system 彭文丽 袁跃 王杰 刘小婷 邓念龙 杨彬 李亮 湖北师范大学生命科学学院 搅拌罐式生物反应器 3.中空纤维管生物反应器 中空纤维管生物反应器的基本原理是泵动培养液通过成束的合成空心纤维管(毛细管) 而使细胞固着在毛细管内壁生长。它的用途较广, 既可培养悬浮生长的细胞, 又可培养贴壁依赖性细胞, 细胞密度最高可达109 mL-1。主要用于杂交瘤细胞生产单克隆抗体。 细胞大规模培养过程中要注意环境监测 细胞大规模培养过程中要注意过程监控 海藻酸钙凝胶 海藻酸钙凝胶包埋法是将动物细胞与一定量的海藻酸钠溶液混合均匀, 然后滴到一定浓度的氯化钙溶液中形成直径约1 mm 内含动物细胞的海藻酸钙胶珠, 分离洗涤后即可用于培养。此法操作时条件温和, 对活细胞损伤小。但固定后机械强度不高。为了大量制备海藻酸钙凝胶包埋的固定化细胞, 国外已有专门的振动喷嘴设备可供使用。 湖北师范学院生命科学院 琼脂糖凝胶 琼脂糖凝胶可用二相法制得。将含有细胞的琼脂糖溶液分散到一个水不溶相中(如石蜡油) , 形成直径0. 2 mm 凝胶珠珠, 移去石蜡油后, 细胞即可进行培养。同海藻钙一样, 琼脂糖更适于培养悬浮细胞。尽管凝胶珠形成过程很复杂, 目前放大体积不超过20 L 。但琼脂糖凝胶无毒性, 具有较大的空隙, 可以允许大分子物质自由扩散, 因此该法特别适用于蛋白产物的连续生产。有人曾用琼脂糖包埋杂交瘤细胞和淋巴细胞生产单克隆抗体和白细胞介素 。 湖北师范学院生命科学院 血纤维蛋白 将动物细胞与血纤维蛋白原混合, 然后加入凝血酶。凝血酶将血纤维蛋白原转化为不溶性的血纤维蛋白, 将动物细胞固定在其中。血纤维蛋白可以促进细胞贴壁, 因此两种类型的细胞都适于培养。而且基质高度多孔, 允许大分子物质的自由扩散。但机械强度差, 对剪切力很敏感。 湖北师范学院生命科学院 石蜡切片中底部薄层软蜡包埋法 甲基丙烯酸甲酯包埋标本 微囊型包埋法 湖北师范学院生命科学院 5、微囊法（microencapsulation）: 用一层亲水的半透膜将细胞包围在珠状的微囊里，细胞不能逸出，但小分子物质及营养物质可自由出入半透膜；囊内是种微小培养环境，与液体培养相似，能保护细胞少受损伤，故细胞生长好、密度高。微囊直径控制在200-400μm为宜。 湖北师范学院生命科学院 湖北师范学院生命科学院 三.生物反应器分类 1.悬浮培养用反应器：如搅拌反应器、中空纤维反应器、陶质矩形通道蜂窝状反应器、气升式反应器； 2.贴壁培养用反应器：如搅拌反应器（微载体培养）、玻璃珠床反应器、中空纤维反应器、陶质矩形通道蜂窝状反应器； 3.包埋培养用反应器：如流化床反应器、固化床反应器。 按其培养细胞的方式不同，可分三类： 湖北师范学院生命科学院 1.搅拌罐生长反应器 最经典、最早被采用。针对动物细胞培养的特点，采用了不同的搅拌器及通气方式。通过搅拌器的作用使细胞和养分在培养液中均匀分布，使养分充分被细胞利用，并增大气液接触面，有利于氧的传递。 湖北师范学院生命科学院 湖北师范学院生命科学院 机械搅拌装置示意图 湖北师范学院生命科学院 2.气升式生物反应器 气升式生物反应器的基本原理是气体混合物从底部的喷射管进入反应器的中央导流管, 使得中央导流管侧的液体密度低于外部区域从而形成循环。气升式生物反应器主要采用内循环, 但也有采用外循环式。 湖北师范学院生命科学院 特点：没有移动部件、完全密封、便于无菌操作、不易染菌、设计简单、便于放大、氧转换率高。 （二）气升式流程 湖北师范学院生命科学院 湖北师范学院生命科学院 (三) 中空纤维细胞培养反应器流程 湖北师范学院生命科学院 4.流化床生物反应器 流化床生物反应器的传质性能好, 并在循环系统中 采用膜气体交换器, 能快速提供给高密度细胞所需 要的氧, 同时排出代谢产物; 反应器中的液体流速 足以使细胞微粒悬浮却不损坏脆弱的细胞。流化 床生物反应器满足了高密度细胞培养, 使高产量细 胞长时间停留在反应器中, 优化了细胞生长与产物 合成的环境等细胞培养的要求。可用于贴壁依赖 性细胞和非贴壁依赖性细胞的培养 湖北师范学院生命科学院 （四）流化床式反应器结构及工作原理 湖北师范学院生命科学院 流化床反应器： 固体颗粒被流体吹起呈悬浮状态，可作上下左右剧烈运动和翻动，好象是液体沸腾一样，故流化床反应器又称沸腾床反应器。适合于固定化细胞的培养。 1—旋风分离器 2—筒体扩大段 3—催化剂入口 4—筒