gcms方法检测全血中15种农药残留.ppt

GC/MS方法检测全血中15种农药残留 主要内容 研究背景 大量研究表明，农药在大量使用后会在环境中存在一定的残留，农药的化学性质和使用量不同，残留的量也不同。在国内外研究中，关于农药在生物样本中的残留主要集中在有机氯、有机磷、拟除虫菊酯类和除草剂四大类。 在我国急性和慢性中毒时有发生，为确定突发化学中毒事件的性质，需要我国人群除草剂残留量的背景值作为定性的参考依据。 因此，作为国家科技支撑计划课题(2006BAI06B02)的一部分，为下一步建立常用除草剂人群残留量的参比值和全国范围的具有代表性的生物样品库提供技术支持和可靠数据。 该方法较目前常用方法灵敏度有很大提高，适用于血液中农药含量较低的样品检测。 应用范围 人血液中15种常用农药的样品提取方法和GC/MS定性、定量检测方法。 有机磷农药 甲拌磷、二嗪农、阿特拉津、乐果、甲基对硫磷、马拉硫磷 有机氯农药 氯丹、a-硫丹、b-硫丹 拟除虫菊酯类农药 联苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯 除草剂 2,4-D丁酯、扑草净、丁草胺 试 剂 甲醇、二氯甲烷 15种农药标准品（甲拌磷、二嗪农、阿特拉津、乐果、2,4-D丁酯、扑草净、马拉硫磷、甲基对硫磷、丁草胺、氯丹、α-硫丹、β-硫丹、联苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯） 保护剂古洛糖酸内酯（sigma试剂公司99.75%） 仪 器 Angilent 6890-5973气相色谱-质谱联用仪 色谱柱 DB-35MS（30m×0.25mm×0.25μm） 浓缩仪（氮气吹干） 涡旋振荡器（转速可调节） 超声仪 离心机 标准保护剂溶液的配置 准确称取100mg古洛糖酸内酯，用甲醇定容稀释至50ml容量瓶中，轻轻震荡混匀，即配制成浓度为2mg/ml的保护剂溶液； -4℃低温保存。 标准液的配置 标准液的配置 样品预处理（1） 涡旋震荡、超声提取 将加有1.5ml全血的螺口具塞15ml试管中，缓慢加入6ml二氯甲烷。 在涡旋振荡器上涡旋振荡5min（即使发生乳化现象，仍要继续震荡），转速以液面不接触到试管塞为准。 放入清洗超声仪中超声辅助提取20min。 样品预处理（2） 冷冻破乳、离心分层 将超声后的试管放入-20℃以下的冰箱中冷冻20-30min。 冷冻后取出放置至完全融化后，用高速离心机以3000rpm离心15min，至完全分为三层。 将上层液体倒入废液池内，用一只未使用过的空白吸管将中间层固体（沉淀蛋白）轻轻挤压到试管一侧，然后将下层提取液全部转移至另一支洁净普通玻璃试管中。 注：转移过程中一定要缓慢，以免将其他杂质一同倒入试管中。 样品处理（3） 氮吹浓缩、微量定容 将存有提取液的试管在浓缩仪上吹至近干后，用150μl甲醇保护剂溶液溶解，最大转速涡旋振荡2min，移入含有250μl内插管的进样小瓶中，供气相色谱-质谱联用仪检测。 在氮吹浓缩的过程中要注意氮气的流速不能太快，以免导致目标化合物的丢失，但也不宜太慢，会浪费时间。浓缩过程中温度控制在50℃，吹干时间控制在10min。 色谱、质谱条件 色谱条件 色谱柱：DB-35MS（30m×0.25mm×0.25μm）； 载气：高纯氦气，流速1ml/min； 进样口温度：280℃； 色谱程序：120℃（保持1.00min） 20℃/min 240℃（保持0.00min） 10℃/min 280℃（保持4.00min）20℃/min 320℃（保持6.00min）共23min。 进样量：1μl； 进样方式：脉冲不分流进样 / 不分流进样； 质谱条件 电离电压：70eV； 溶剂延迟：6.5min； 离子源温度：230℃； 四极杆温度：150℃； 选择离子参数 选择离子参数 实验结果 离子选择扫描模式图谱 结果讨论与分析 结果讨论与分析 提取方法的确定 固相萃取 Agilent C18： 2,4-D丁酯和联苯菊酯回收率较低 Oasis HLB C18固相萃取小柱 氨基柱 苯基柱 氧化铝柱 提取方法的确定 液液提取 正己烷 乙酸乙酯 正己烷-乙酸乙酯 正己烷-乙腈 二氯甲烷：提取回收率效果较好，且只需要一次提取，就能满足回收率要求，只是毒性较大，操作时需谨慎。 保护剂的使用 在采用GC和GC-MS对不同样品进行农药残留检测分析时，经常会发现有些待分析物灵敏度较低，或是峰型很差，拖尾严重，积分结果偏差较大。 这些现象可能是由待分析物在进样口的高温环境中降解产生，或是待分析物在进样系统的活性位点滞留引起的向毛细管移动减慢导致的。 保护剂的作用 根据相关参考文献，对保护剂用于补偿基质效应进行了研究，认为古洛糖酸内酯(Gulonic acid γ- lactone)具有良好的补偿作用。 适量的古洛糖酸内酯对农药有较好的保护作用，能够有效地补偿因系统