猪血液中超氧化物歧化酶（SOD）的提取和活力测定.docVIP

猪血液中超氧化物歧化酶（SOD）的提取及活力测定 学校 青岛农业大学 学院 生命科学学院 年级专业 生物技术1001 姓名 毛嘉宁王颖 摘 要 哺乳类动物血液中存在着大量的生物活性物质 ,如超氧化歧化酶 (Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ,简称ＳＯＤ)、凝血酶等。是生物体内重要的超氧阴离子自由基清除剂，能催化生物体内超氧自由基歧化反应，对机体细胞起保护作用，己成为化学及生物化学研究领域中热门的研究课题ＳＯＤ在临床上有广泛用途 (延缓人体衰老、防止色素沉着、消除局部炎症等 ) ,特别是治疗风湿性关节炎、慢性多发性关节炎及放射治疗后的炎症恒温水浴 4.2离心机 布氏漏斗、抽滤瓶烧杯、量筒、棒猪血3.8%（质量分数）柠檬酸三钠 0.9%（质量分数）氯化钠 95%（体积分数）乙醇 氯仿 丙酮 pH7.6、2.5mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液a.称取Tris0.61g，EDTA-2Na0.037g,用双蒸馏水溶解至80ml左右，用HCl调节pH=8.20（用pH计校正），最后定容至100mL。 5.10 10mmol/L HCl 5.11 50mmol/L 邻苯三酚 a．称取邻苯三酚0.063g，用10mmol/L HCl溶液溶解，定容至10mL，避光保存。 6 实验操作步骤 6.1分离血球 取新鲜猪血，加入到3.8%柠檬酸三钠抗凝液中，新鲜猪血与抗凝液的比例为3：1，轻轻搅拌均匀，4 000r/min离心20min，收集红血球。 除血红蛋白 红血球用3倍体积生理盐水洗涤，4 000r/min离心20min，重复三次，然后向洗净的红血球加入1～1.1倍体积去离子水，搅拌溶血30min，再向溶血液中分别缓慢加入0.25倍体积的预冷95%乙醇和0.15倍体积的预冷氯仿，剧烈搅拌15min左右，静置1h，然后4 000r/min离心20min除去变性血红蛋白沉淀，取清液，过滤，收集滤液热变性 上清液加热到65，保温10min，然后迅速冷却到室温，3 000r/min离心20min，弃去沉淀物，收集上清液沉淀 清液在盐冰浴中冷却，然后在-5以下的操作温度下，加入1.5倍量预冷丙酮，边加边搅拌均匀，即有白色沉淀产生， 4 000r/min离心20min用pH7.6的2.5mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液透析，即得粗SOD溶液）].动物医学进展，2007,28（7）：70-75 [3] 顾洪雁,袁均林,王建和,何毅温度对猪血提取超氧化物歧化酶的影响[J].华中师范大学学报(自然科学版)2002年03期 4