分子生物学技术平台细胞培养与分析技术平台免疫组化平台.PDF

分子生物学技术平台 主要仪器设备包括 ImageQuant LAS 4000mini 超灵敏化学发光成像仪、全自动凝胶 图像分析系统FR-980A、基因扩增仪、电泳系统、转印系统、Thermo MK3 酶标仪、台 式高速离心机、高速冷冻离心机、超纯水机、制冰机、电子天平、PH 计等。  琼脂糖凝胶电泳实验  PCR 实验  Western blot  ELISA 实验 细胞培养与分析技术平台 目前拥有万级净化细胞培养室，其内设有生物安全柜、CO2 培养箱、厌氧培养箱、 细胞计数仪、离心机以及倒置、正置显微镜等相关设备。  细胞培养  实时细胞分析（细胞增殖和毒性的动态监控、受体活性的功能监测、细胞粘附和细 胞伸展过程的监测等）  观察与拍摄细胞的荧光染色图像 免疫组化平台 主要仪器设备包括 Leica CM1950 冷冻切片机、显微镜等。  组织的 OCT 包埋、冰冻切片  免疫组化染色 1 罗氏xCELLigence RTCA DP 系统在细胞分析方面的功能简介如下： 1、 细胞增殖和毒性的动态监控 利用多种癌症细胞系模型进行的细胞增殖分析是评估不同抗癌化合物的效能的基础 分析方法之一。xCELLigence 系统可用来定量和动态地检测细胞增殖和细胞毒性。每种 细胞都有独特的增殖曲线，增殖曲线取决于接种密度。这个独特的生长曲线可作为细胞 系质量控制的测量，来确保同一实验和不同实验间的一致性（图 1）。 图 1 NIH3T3 和 HT1080 细胞的动力学增殖曲线。a. 细胞黏附和延展阶段 b. 每个细 胞株特有的停滞阶段 c. 指数生长期 d.融合阶段 2 参考文献： Rebecca A. Whipple, Michael A. Matrone, Edward H. Cho, et al. Epithelial-to-Mesenchymal Transition Promotes Tubulin Detyrosination and Microtentacles that Enhance Endothelial Engagement Cancer Res Published OnlineFirst October 5, 2010. 2、 受体活性的功能监测 G 蛋白偶联受体（GPCR ）调节肌动蛋白细胞骨架，因此可利用这个信息作为 GPCR 活性的功能和生物相关的参照。如图 2a 所示，表达人 H1 组胺受体的 CHO-K1 细胞接 种在 E 微孔板中，并用组胺刺激。组胺诱导产生了一个与肌动蛋白细胞骨架重排相关的 瞬时的细胞信号（图 2b ）。对组胺浓度取对数与最大细胞反应做图，就产生了一个EC50 值的剂量应答曲线（图 2c ）。xCELLigence 系统的优势在于：首先，读数是非损伤性的， 可以在多个时间点进行刺激评估脱敏作用和其他受体类型的干扰。第二，除了偶联 Gq 亚家族 G 蛋白的组胺受体，表达其他偶联 Gs 和 Gi 受体的细胞也可用 xCELLigence 系 统来监测。第三，表达内源 GPCR 的细胞也可用 xCELLigence 系统来分析，无需过表 达外源 GPCR 或改造细胞表达多种 GPCR。这样就可以真实评估生理条件适当的细胞类 型的受体。除了 GPCR，其他重要药物靶点的受体类型，比如酪氨酸激酶受体，也可以 通过 xCELLigence 系统来进行细胞功能的分析。 图 2 GPCR 活化的功能检测。(a) 表达组蛋白 H1 受体的 CHO-K1 细胞接种到 E-Plates 上并 持续观察。在所示的时间点加入 100 nM 组胺，使用 xCELLigence 监控细胞动力学响应。 (b) 表达组蛋白 H1 受体的 CHO-K1 接种到 16 孔板上，与(a)同样的时间点加入 100nM 组胺。细胞固定 15 分钟后，使用 FITC-Phalloidin 染色肌动蛋白细胞骨架，用荧光显微 镜拍照。(c) xCELLigence 检测到的组胺剂量与响应相关曲线。 参考文献: Aihua Jiang a, Hu